鴨瘟的動態(tài)病理學研究和鴨CD4的克隆.pdf

1、鴨瘟(Duck plague, DP)又名鴨病毒性腸炎(Duck viral enteritis， DVE)，是鴨、鵝和其他雁形目禽類的一種急性敗血性、接觸性傳染病，其發(fā)病率和死亡率都非常高，給全世界養(yǎng)鴨業(yè)帶來了巨大的經(jīng)濟損失。
　　 本試驗將108羽35日齡櫻桃谷鴨隨機分為兩組：對照組36羽，試驗組72羽，分別隔離飼養(yǎng)，試驗組每羽腿部肌肉注射0.1mL病毒液，復制鴨瘟病理模型。對所建立的病理模型進行臨床癥狀觀察、病理組織學檢查

2、、超微結(jié)構(gòu)變化觀察，同時對11項血清生理生化指標ALT、AST、ALT/AST、LD、AMY、ALB、GLB、TP、A/G、ALP、CK及皮質(zhì)醇(Cor)、腫瘤壞死因子α(TNF-α)兩項細胞因子等方法對所建立的病理模型進行動態(tài)變化。本研究同時克隆出櫻桃谷鴨和麻鴨CD4ORF基因序列，并對其進行分析，為進一步研究CD4+T淋巴細胞在闡明禽類疫病的免疫機理奠定基礎。
　　 人工感染鴨瘟病毒的試驗鴨臨床癥狀表現(xiàn)為：感染后4d病鴨食欲

3、減退，發(fā)生頑固性下痢，糞便呈綠色或灰白色，泄殖腔紅腫，肛門外翻，病鴨眼角流出澄清透明的漿液性分泌物，眼周圍呈現(xiàn)“淚斑”，鼻腔流出稀薄或黏稠的分泌物，呼吸困難，并開始出現(xiàn)死亡；感染5d后有的鴨頭頸腫大，死亡率為48.6％。
　　 對人工感染鴨瘟病毒的試驗鴨外周血生理生化指標的測定結(jié)果表明，病毒感染對外周血各項指標都有一定的影響，在感染后，感染組鴨血清中ALT、AST、LD、AMY的含量始終明顯高于對照組；感染組鴨血清中ALT/AS

4、T、ALB、GLB、TP、A/G含量始終低于對照組；ALP、CK含量感染組較對照組比較先升高后下降；而TNF-α和Cor無明顯差異。
　　 感染組鴨的組織學檢查結(jié)果為：肝臟在感染初期肝細胞發(fā)生水泡變性、脂肪變性，感染后3d組織出現(xiàn)壞死，后期壞死進一步加??；感染后黏膜上皮變薄甚至消失，隨著病情的發(fā)展，組織發(fā)生充血、出血、壞死；腸道感染后2d肌層出現(xiàn)淋巴濾泡，5d時淋巴濾泡細胞數(shù)量減少，并在出現(xiàn)淋巴濾泡的地方發(fā)生出血、壞死；腎臟在感

5、染后腎小管上皮細胞發(fā)生壞死，有的上皮細胞從基底膜脫落到管腔中，感染后期組織充血、出血，并伴有炎性細胞浸潤；胰腺在感染后4d組織發(fā)生壞死，且隨著病情的發(fā)展，壞死面積逐漸增大；動物感染后心肌的變化不十分明顯，在感染后3d出現(xiàn)了少量的出血現(xiàn)象，并在感染后4d發(fā)生心內(nèi)膜出血；脾臟、胸腺、法氏囊均在感染后出現(xiàn)淋巴細胞數(shù)量減少的現(xiàn)象，同時在感染后期，組織發(fā)生壞死。
　　 脾臟、胸腺超微結(jié)構(gòu)觀察結(jié)果：感染1d后，在感染鴨脾臟中觀察到吞噬了異物

6、的巨噬細胞，感染后2d內(nèi)質(zhì)網(wǎng)有的發(fā)生擴張，后期發(fā)現(xiàn)多個壞死的細胞，并在感染5d時觀察到吞噬了壞死細胞的巨噬細胞；感染1d后，即在感染鴨胸腺胞質(zhì)內(nèi)發(fā)現(xiàn)病毒顆粒，感染后3d觀察到異嗜性粒細胞正在伸出偽足吞噬壞死細胞殘留的碎片，后期壞死細胞增多，并在細胞內(nèi)、外均發(fā)現(xiàn)了病毒顆粒的存在。
　　 根據(jù)GeneBank中收錄的北京鴨CD4基因序列(AF378701)設計合成一對特異性引物，分別對櫻桃谷鴨和麻鴨CD4ORF基因進行擴增，并測定其