人卵巢漿液性囊腺癌侵襲轉(zhuǎn)移與β-catenin相關(guān)性的實驗研究.pdf

1、腫瘤轉(zhuǎn)移是惡性腫瘤治療失敗和患者死亡的主要原因，涉及一系列極其復(fù)雜的相互作用過程。首先,腫瘤細(xì)胞必須脫離原發(fā)灶,粘附在細(xì)胞外基質(zhì)上,然后降解基質(zhì)后進(jìn)行轉(zhuǎn)移。腫瘤細(xì)胞間粘附的喪失是腫瘤浸潤轉(zhuǎn)移的第一步,也是關(guān)鍵的一步。近年來，β-catenin因其所扮演的雙重角色(參與細(xì)胞粘附及參與Wnt信號轉(zhuǎn)導(dǎo))而得到了關(guān)注，在實際臨床中，婦科腫瘤中卵巢癌又尤其以易復(fù)發(fā)易轉(zhuǎn)移而難以治療。故為了探明卵巢癌復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的機(jī)制，提高患者的5年生存率，迫切需要為其

2、治療尋找新的靶點。
　　本實驗首先探討了β-catenin在卵巢腫瘤形成和轉(zhuǎn)化中的表達(dá)特點及其與卵巢癌的臨床病理學(xué)參數(shù)的關(guān)系，接著從β-catenin在人卵巢漿液性囊腺癌高低轉(zhuǎn)移細(xì)胞株HO-8910PM及HO-8910中的表達(dá)情況探討其與卵巢癌侵襲轉(zhuǎn)移的關(guān)系，并且研究了β-catenin在常用化療藥物表阿霉素作用過程中的變化。以期待為進(jìn)一步的臨床研究提供一定的實驗室依據(jù)。
　　一、β-catenin在卵巢腫瘤中的表達(dá)

3、　　所有標(biāo)本來自第四軍醫(yī)大學(xué)西京醫(yī)院婦產(chǎn)科及病理科2000～2007年存檔的石蠟包埋標(biāo)本，經(jīng)臨床、組織病理學(xué)和免疫組化結(jié)果證實診斷。根據(jù)存檔的HE切片，選擇無壞死、無大量出血、無色素的蠟塊進(jìn)行連續(xù)切片。選取臨床病理資料完整者166例，所選病人的平均年齡約56.4歲，手術(shù)前未接受過化療、放療或免疫治療。采用免疫組織化學(xué)SP染色法檢測126例卵巢癌、20例卵巢交界性瘤、10例卵巢良性腫瘤和10例正常卵巢組織中β-catenin的表達(dá)，采用S

4、PSS12.0軟件的卡方檢驗統(tǒng)計方法進(jìn)行分析。
　　1.β-cat在卵巢癌組織、卵巢交界性腫瘤組織、卵巢良性腫瘤組織及正常卵巢組織的細(xì)胞胞膜及胞質(zhì)中均表達(dá),但β-cat在卵巢癌組織中表達(dá)與在卵巢良性腫瘤組織及正常卵巢組織中表達(dá)比較,差異有顯著性(P<0.01)。
　　2.β-cat表達(dá)與臨床分期呈負(fù)相關(guān)性,從Ⅰ期到Ⅳ期，β-cat陽性表達(dá)率降低,臨床分期Ⅰ期的卵巢癌β-cat陽性表達(dá)率為87.5％,臨床分期Ⅳ期的卵巢癌β-c

5、at陽性表達(dá)率為73.3％,兩者比較差異有顯著性(P<0.05)。
　　二、人卵巢漿液性囊腺癌侵襲轉(zhuǎn)移與β-catenin相關(guān)性的實驗研究
　　選用第四軍醫(yī)大學(xué)實驗室保存的人卵巢漿液性囊腺癌高低轉(zhuǎn)移細(xì)胞株HO-8910PM及HO-8910細(xì)胞，運(yùn)用免疫熒光法，Western Blotting以及RT-PCR檢測細(xì)胞中β-catenin表達(dá)水平，MTT法、Transwell小室法檢測細(xì)胞侵襲能力、遷移能力及粘附能力。
　

6、　1．Western blotting檢測β-cat(128KD)在HO-8910細(xì)胞中高表達(dá)，而在HO-8910PM中低表達(dá)。
　　2．RT-PCR檢測β-cat（298bp）在HO-8910細(xì)胞中高表達(dá)，而在HO-8910PM測得極少量表達(dá)。
　　3．β-cat在低轉(zhuǎn)移的HO-8910細(xì)胞中高表達(dá)，僅位于細(xì)胞膜上，呈較強(qiáng)的綠色熒光；而在高轉(zhuǎn)移的HO-8910PM細(xì)胞中低表達(dá)，細(xì)胞質(zhì)與細(xì)胞膜均有表達(dá)，但綠色熒光較弱。

7、>　　4．高轉(zhuǎn)移細(xì)胞株HO-8910PM細(xì)胞的侵襲能力高于低轉(zhuǎn)移細(xì)胞HO-8910細(xì)胞，但遷移能力二者差別不明顯。
　　5．細(xì)胞粘附力檢測20min前兩株細(xì)胞的粘附能力沒有明顯差別，20min、40min時高轉(zhuǎn)移細(xì)胞株HO-8910PM細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)的粘附能力明顯高于低轉(zhuǎn)移細(xì)胞株HO-8910細(xì)胞，但100min后兩種細(xì)胞基本全部粘附，其細(xì)胞粘附能力沒有明顯差別。
　　三、β-catenin在常用化療藥物表阿霉素作用過程中

8、的研究
　　表阿霉素是蒽環(huán)類抗腫瘤藥物,它通過插入DNA堿基對使DNA降解,抑制DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅱ,影響DNA轉(zhuǎn)錄而實現(xiàn)腫瘤的治療作用。表阿霉素對包括卵巢癌在內(nèi)的多種腫瘤細(xì)胞系具有良好的抑制增殖、誘導(dǎo)凋亡的作用;是治療卵巢癌、預(yù)防卵巢癌術(shù)后復(fù)發(fā)和卵巢癌復(fù)發(fā)后介入治療的最常用化療藥物。試驗一提示了β-catenin與卵巢癌轉(zhuǎn)移侵襲之間的密切關(guān)系。而表阿霉素在抑制腫瘤轉(zhuǎn)移侵襲方面的強(qiáng)大作用有目共睹，故綜合上述情況提示：表阿霉素抗卵巢癌

9、轉(zhuǎn)移侵襲的作用與β-catenin這個因子之間是否有一定關(guān)系？如果有關(guān)系，那又是怎樣相互作用的？是否有一定的劑量依賴性？本實驗將正常HO-8910細(xì)胞做為對照組，用Western blot分別檢測正常HO-8910及及表阿霉素處理后HO-8910細(xì)胞中的β-catenin蛋白的表達(dá)。
　　結(jié)果：實驗組水平顯著高于對照組。隨阿霉素濃度逐漸增高,其表達(dá)強(qiáng)度逐漸增強(qiáng)。
　　結(jié)論：阿霉素的抗腫瘤作用可能與β-catenin有密切關(guān)系