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文檔簡(jiǎn)介
1、[目的]:胃癌是我國(guó)常見(jiàn)的惡性腫瘤,其預(yù)后較差,生存率低。胃癌的侵襲轉(zhuǎn)移是影響其預(yù)后的重要因素之一。隨著對(duì)胃癌侵襲轉(zhuǎn)移研究的不斷深入,現(xiàn)在已經(jīng)認(rèn)識(shí)到,胃癌侵襲轉(zhuǎn)移是一個(gè)多階段、多步驟的復(fù)雜生物學(xué)過(guò)程,其中癌細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)及侵襲能力是產(chǎn)生轉(zhuǎn)移的必要條件。胃癌的侵襲轉(zhuǎn)移在分子水平上與細(xì)胞粘附、細(xì)胞外基質(zhì)的降解、細(xì)胞運(yùn)動(dòng)有關(guān)。但是目前仍然不清楚胃癌發(fā)生發(fā)展和侵襲轉(zhuǎn)移的具體分子機(jī)制。小分子G蛋白是重要的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)分子,參與肌動(dòng)蛋白細(xì)胞骨架的組裝、基因
2、轉(zhuǎn)錄、細(xì)胞周期進(jìn)展、細(xì)胞粘附和細(xì)胞運(yùn)動(dòng)的調(diào)節(jié)。Rho是小分子G蛋白超家族中的亞族之一,包括Rho(RhoA、RhoB、RhoC)、Rac(Rac1、Rac2、Rac3,RhoG)、Cdc412(Cdc42H、G25K、TC10)、Rnd(Rho/ERnd3、Rnd1/Rho1、Rnd2/Rno7)、RhoD和TTE,能參與調(diào)節(jié)腫瘤的發(fā)生發(fā)展、侵襲轉(zhuǎn)移。研究表明RhoC對(duì)腫瘤轉(zhuǎn)移的作用尤為突出,被稱(chēng)為腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移的分子開(kāi)關(guān)。但是目前關(guān)于R
3、hoC在胃癌發(fā)生發(fā)展、侵襲轉(zhuǎn)移的作用,以及與已經(jīng)證實(shí)與胃癌侵襲轉(zhuǎn)移有關(guān)的粘附分子ICAM-1、CD44v6的關(guān)系尚未見(jiàn)報(bào)道。為此,我們首先觀察RhoC蛋白在胃癌MKN45細(xì)胞系中的表達(dá),檢測(cè)RhoC在來(lái)源相同但侵襲轉(zhuǎn)移表型有異之胃癌細(xì)胞中的表達(dá),分析其與胃癌細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移能力的相關(guān)性,接著研究RhoC在胃癌組織中的表達(dá)與臨床病理特征和侵襲轉(zhuǎn)移的關(guān)系,以及粘附分子ICAM-1、CD44v6在胃癌組織中的表達(dá)。初步研究RhoC和ICAM-1、
4、CD44v6在胃癌組織中的表達(dá)是否具有相關(guān)性。期望通過(guò)以上研究,初步探討RhoC蛋白對(duì)胃癌侵襲轉(zhuǎn)移的作用,為臨床防治提供新靶點(diǎn)與理論依據(jù)。 [方法]:(1)采用層粘連蛋白(LN)粘附法,由胃癌MKN-45細(xì)胞株中篩選出對(duì)LN親和力高或低的細(xì)胞亞株,觀察兩者問(wèn)在細(xì)胞骨架形態(tài)學(xué)方面以及增殖能力、細(xì)胞周期分布的差異,然后應(yīng)用細(xì)胞免疫組化技術(shù)檢測(cè)并分析RhoC蛋白表達(dá)與胃癌細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移能力的關(guān)系;(2)收集臨床不同分期的胃癌患者的手術(shù)切
5、除標(biāo)本40例,所有病例資料完整,術(shù)前未經(jīng)放療和化療,術(shù)后病理證實(shí)均為腺癌。并收集經(jīng)手術(shù)切除或者經(jīng)胃鏡取材證實(shí)為非胃癌組織標(biāo)本30例。常規(guī)切片并HE染色,根據(jù)1987年國(guó)際抗癌聯(lián)盟(UICC)公布的PTNM分期標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行臨床分期。以免疫組化SABC法檢測(cè)RhoC、ICAM-1、CD44v6在胃癌組織和正常組織中的表達(dá),分析它們與胃癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系。 [結(jié)果]:(1)采用LN粘附法可以由胃癌MKN-45細(xì)胞株中篩選出對(duì)LN親和力高
6、或低的細(xì)胞亞株,其中LN低親和力亞株的細(xì)胞骨架結(jié)構(gòu)較高親和力亞株排列規(guī)則有序、肌動(dòng)蛋白小體和細(xì)胞表面突起與偽足少,高親和力亞株在細(xì)胞增殖活力方面均強(qiáng)于低親和力亞株(P<0.05),同時(shí)RhoC在高親和力亞株中的表達(dá)也顯著高于其在低親和力亞株的表達(dá)(P<0.05);(2)30例非癌胃粘膜組織均不表達(dá)RhoC。40例胃癌腫瘤細(xì)胞中,25例表達(dá)RhoC(其中陽(yáng)性17例,強(qiáng)陽(yáng)性8例),陽(yáng)性率為62.5%,兩者之間具有顯著差異(x2=27.560
7、1,P=0.001);(3)RhoC的表達(dá)與腫瘤細(xì)胞分化(P=0.9767)、浸潤(rùn)深度(P=0.1411)未見(jiàn)相關(guān)性,與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(P=0.0136)、PTNM分期存在相關(guān)性(P=0.0391);(4)CD44v6和ICAM-1的表達(dá)與腫瘤細(xì)胞分化、浸潤(rùn)深度無(wú)關(guān)(P>0.05),與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、PTNM分期具有相關(guān)性(P<0.05)。(5)RhoC與CD44v6的表達(dá)存在相關(guān)性(r=0.355,P=0.006),與ICAM-1的表達(dá)存在相
8、關(guān)性(r=0.354,P=0.003)。當(dāng)RhoC為陽(yáng)性,CD44v6和ICAM-l兩者之一為陽(yáng)性時(shí),對(duì)預(yù)測(cè)胃癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的靈敏性和特異性分別為93.75%、62.5%。 [結(jié)論]:(1)RhoC在胃癌細(xì)胞中的表達(dá)強(qiáng)度與其侵襲轉(zhuǎn)移能力成正相關(guān);(2)RhoC蛋白的陽(yáng)性表達(dá)預(yù)示胃癌具有較強(qiáng)的侵襲轉(zhuǎn)移能力,RhoC蛋白可作為一項(xiàng)預(yù)測(cè)胃癌轉(zhuǎn)移潛能的生物學(xué)指標(biāo),聯(lián)合檢驗(yàn)RhoC與CD44v6和ICAM-1的表達(dá)有望成為預(yù)測(cè)胃癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移
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