RhoC蛋白與胃癌侵襲轉(zhuǎn)移相關(guān)性的初步研究.pdf

1、[目的]：胃癌是我國常見的惡性腫瘤，其預后較差，生存率低。胃癌的侵襲轉(zhuǎn)移是影響其預后的重要因素之一。隨著對胃癌侵襲轉(zhuǎn)移研究的不斷深入，現(xiàn)在已經(jīng)認識到，胃癌侵襲轉(zhuǎn)移是一個多階段、多步驟的復雜生物學過程，其中癌細胞的運動及侵襲能力是產(chǎn)生轉(zhuǎn)移的必要條件。胃癌的侵襲轉(zhuǎn)移在分子水平上與細胞粘附、細胞外基質(zhì)的降解、細胞運動有關(guān)。但是目前仍然不清楚胃癌發(fā)生發(fā)展和侵襲轉(zhuǎn)移的具體分子機制。小分子G蛋白是重要的信號轉(zhuǎn)導分子，參與肌動蛋白細胞骨架的組裝、基因

2、轉(zhuǎn)錄、細胞周期進展、細胞粘附和細胞運動的調(diào)節(jié)。Rho是小分子G蛋白超家族中的亞族之一，包括Rho(RhoA、RhoB、RhoC)、Rac(Rac1、Rac2、Rac3，RhoG)、Cdc412(Cdc42H、G25K、TC10)、Rnd(Rho/ERnd3、Rnd1/Rho1、Rnd2/Rno7)、RhoD和TTE，能參與調(diào)節(jié)腫瘤的發(fā)生發(fā)展、侵襲轉(zhuǎn)移。研究表明RhoC對腫瘤轉(zhuǎn)移的作用尤為突出，被稱為腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移的分子開關(guān)。但是目前關(guān)于R

3、hoC在胃癌發(fā)生發(fā)展、侵襲轉(zhuǎn)移的作用，以及與已經(jīng)證實與胃癌侵襲轉(zhuǎn)移有關(guān)的粘附分子ICAM-1、CD44v6的關(guān)系尚未見報道。為此，我們首先觀察RhoC蛋白在胃癌MKN45細胞系中的表達，檢測RhoC在來源相同但侵襲轉(zhuǎn)移表型有異之胃癌細胞中的表達，分析其與胃癌細胞侵襲轉(zhuǎn)移能力的相關(guān)性，接著研究RhoC在胃癌組織中的表達與臨床病理特征和侵襲轉(zhuǎn)移的關(guān)系，以及粘附分子ICAM-1、CD44v6在胃癌組織中的表達。初步研究RhoC和ICAM-1、

4、CD44v6在胃癌組織中的表達是否具有相關(guān)性。期望通過以上研究，初步探討RhoC蛋白對胃癌侵襲轉(zhuǎn)移的作用，為臨床防治提供新靶點與理論依據(jù)。 [方法]：(1)采用層粘連蛋白(LN)粘附法，由胃癌MKN-45細胞株中篩選出對LN親和力高或低的細胞亞株，觀察兩者問在細胞骨架形態(tài)學方面以及增殖能力、細胞周期分布的差異，然后應用細胞免疫組化技術(shù)檢測并分析RhoC蛋白表達與胃癌細胞侵襲轉(zhuǎn)移能力的關(guān)系；(2)收集臨床不同分期的胃癌患者的手術(shù)切

5、除標本40例，所有病例資料完整，術(shù)前未經(jīng)放療和化療，術(shù)后病理證實均為腺癌。并收集經(jīng)手術(shù)切除或者經(jīng)胃鏡取材證實為非胃癌組織標本30例。常規(guī)切片并HE染色，根據(jù)1987年國際抗癌聯(lián)盟(UICC)公布的PTNM分期標準進行臨床分期。以免疫組化SABC法檢測RhoC、ICAM-1、CD44v6在胃癌組織和正常組織中的表達，分析它們與胃癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系。 [結(jié)果]：(1)采用LN粘附法可以由胃癌MKN-45細胞株中篩選出對LN親和力高

6、或低的細胞亞株，其中LN低親和力亞株的細胞骨架結(jié)構(gòu)較高親和力亞株排列規(guī)則有序、肌動蛋白小體和細胞表面突起與偽足少，高親和力亞株在細胞增殖活力方面均強于低親和力亞株(P＜0.05)，同時RhoC在高親和力亞株中的表達也顯著高于其在低親和力亞株的表達(P＜0.05)；(2)30例非癌胃粘膜組織均不表達RhoC。40例胃癌腫瘤細胞中，25例表達RhoC(其中陽性17例，強陽性8例)，陽性率為62.5％，兩者之間具有顯著差異(x2=27.560

7、1，P=0.001)；(3)RhoC的表達與腫瘤細胞分化(P=0.9767)、浸潤深度(P=0.1411)未見相關(guān)性，與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(P=0.0136)、PTNM分期存在相關(guān)性(P=0.0391)；(4)CD44v6和ICAM-1的表達與腫瘤細胞分化、浸潤深度無關(guān)(P＞0.05)，與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、PTNM分期具有相關(guān)性(P＜0.05)。(5)RhoC與CD44v6的表達存在相關(guān)性(r=0.355，P=0.006)，與ICAM-1的表達存在相

8、關(guān)性(r=0.354，P=0.003)。當RhoC為陽性，CD44v6和ICAM-l兩者之一為陽性時，對預測胃癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的靈敏性和特異性分別為93.75％、62.5％。 [結(jié)論]：(1)RhoC在胃癌細胞中的表達強度與其侵襲轉(zhuǎn)移能力成正相關(guān)；(2)RhoC蛋白的陽性表達預示胃癌具有較強的侵襲轉(zhuǎn)移能力，RhoC蛋白可作為一項預測胃癌轉(zhuǎn)移潛能的生物學指標，聯(lián)合檢驗RhoC與CD44v6和ICAM-1的表達有望成為預測胃癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移