RNA沉默CXCR4與乳腺癌侵襲、轉移的相關性實驗研究.pdf

1、第一部分shRNA-CXCR4對人乳腺癌細胞基質(zhì)細胞衍生因子-1受體CXCR4基因表達的影響 目的：探討shRNA-CXCR4對人乳腺癌細胞株MCF-7、MDA-MB-231、MDA-MB-435s CXCR4基因表達及蛋白表達的影響。 方法：通過 shRNA-CXCR4 沉默CXCR4基因后，RT-PCR，Western-blot檢測三株人乳腺癌細胞MCF-7、MDA-MB-231、MDA-MB-435s 的CXCR4

2、mRNA及其蛋白的表達。 結果：shRNA-CXCR4作用于人乳腺癌細胞株MCF-7、MDA-MB-231、MDA-MB-435s 后能明顯抑制CXCR4基因的mRNA及蛋白表達水平(P<0.05)。 結論：shRNA-CXCR4能特異性抑制乳腺癌細胞的CXCR4mRNA及其蛋白的表達。 第二部分shRNA-CXCR4作用于CXCR4基因后對乳腺癌細胞增殖活性的影響 目的：探討shRNA-CXCR4 對人

3、乳腺癌細胞株 MCF-7、MDA-MB-231、MDA-MB-435s 細胞增殖活性的影響。 方法：細胞培養(yǎng)、RNA干擾技術、MTT法和流式細胞儀。 結果：MTT顯示shRNA-CXCR4作用于CXCR4基因后能明顯抑制人乳腺癌細胞株 MDA-MB-231、MDA-MB-435S、MCF-7 的增殖(P<0.05)；流式細胞儀顯示shRNA-CXCR4 作用于CXCR4基因后S期細胞數(shù)量明顯減少(P<0.05)，將更多的

4、細胞阻滯在G<,0>/G<,1>期(P<0.05)。 結論：shRNA-CXCR4 作用于CXCR4基因后能明顯抑制人乳腺癌細胞生長和增殖。 第三部分shRNA-CXCR4作用于CXCR4基因對人乳腺癌細胞侵襲力的影響 目的：研究shRNA-CXCR4作用于CXCR4基因對人乳腺癌細胞侵襲潛力的影響。 方法：通過體外侵襲模型，測定人乳腺癌細胞株通過shRNA-CXCR4作用于CXCR4基因后穿透Matri

5、gel的潛力。 結果：shRNA-CXCR4作用于CXCR4基因后能明顯降低人乳腺癌細胞株MDA-MB-231、MDA-MB-435S、MCF-7穿透 Matrigel的能力(P<0.05)。 結論：shRNA-CXCR4作用于CXCR4基因后能明顯降低人乳腺癌細胞的侵襲潛力。 第四部分shRNA-CXCR4作用于CXCR4基因對腫瘤血管生成潛力的影響 目的：研究shRNA-CXCR4作用于CXCR4基因

6、對人乳腺癌細胞株誘導血管內(nèi)皮細胞形成管腔能力的影響。 方法：應用人乳腺癌細胞株與人臍靜脈內(nèi)皮細胞(HUVEC)雙室聯(lián)合培養(yǎng)技術，觀察人乳腺癌細胞株通過shRNA-CXCR4作用于CXCR4基因后誘導HUVEC形成管腔能力的影響。 結果：shRNA-CXCR4作用于CXCR4基因后能明顯抑制人乳腺癌細胞株MDA-MB-231、MDA-MB-435S、MCF-7誘導HUVEC形成管腔樣結構的能力(P<0.05)。 結

7、論：shRNA-CXCR4作用于CXCR4基因后能明顯抑制人乳腺癌細胞誘導管腔形成能力。 第五部分CXOR4在乳腺癌的表達及其臨床價值 目的：研究人乳腺癌CXCR4的表達及與乳腺癌預后因子的關系。 方法：收集44例乳腺癌標本，RT-PCR檢測CXCR4mRNA的表達，Western-blot檢測CXCR4的蛋白表達。免疫組化檢測ER，PR，C-erbB-2。 結果：CXCR4mRNA及蛋白表達與年齡、月經(jīng)

8、狀況、腫瘤大小、組織學分級、ER，PR無相關(P>0.05)；與腋淋巴結轉移呈正相關，即腋淋巴結轉移≥4個的 CXCR4mRNA 及其蛋白表達水平較腋淋巴結轉移 1-3個及腋淋巴結陰性有顯著增高(P<0.05)，兩兩比較q檢驗亦有顯著差異(P<0.05)。與C-erbB-2表達呈正相關，即C-erbB-2(++/+++)組 CXCR4mRNA 及其蛋白表達水平較C-erbB-2(-/+)組有顯著增高 (P<0.05)。 結論：