人肝癌轉移相關分子的血清蛋白質組學研究.pdf

1、本研究擬采用2-D DIGE聯(lián)合基質輔助激光解吸離子化．串聯(lián)飛行時間質譜(MALDI-TOF/TOF-MS)技術，對肝內轉移和未轉移肝癌患者以及正常人血清進行蛋白質組學研究，篩選出轉移和未轉移肝癌患者血清中表達差異與轉移相關的蛋白質，并對差異蛋白進行初步驗證和功能解析，不僅有助于從分子水平闡述肝癌轉移的發(fā)生發(fā)展機制，也可以為早期診斷肝癌轉移提供有效的預警牛物標志物，并且有望為肝癌轉移的防治提供潛在的藥物靶點。目的: 1.建立和

2、優(yōu)化肝癌患者血清雙向熒光差異凝膠電泳體系(2-D DIGE)的技術平臺，為篩檢肝癌患者血清轉移相關蛋白奠定基礎。 2.運用優(yōu)化后蛋白質組學技術，建立肝癌轉移的血清蛋白質指紋圖譜(PMF)。 3.篩選和鑒定肝癌患者血清中轉移相關表達差異的蛋白質，探討這些差異蛋白在肝癌轉移發(fā)生發(fā)展中的作用，補充肝癌轉移發(fā)生發(fā)展的分子機制。 4.對新發(fā)現(xiàn)有意義的轉移相關的差異蛋白進行初步再驗證，證實2-D DIGE分析和質譜鑒定的真實

3、性、可靠性。 方法: 1.收集36例肝癌患者(肝內轉移18例和未轉移18例)和12例正常人血清樣本。血清樣品經(jīng)不同濃度的乙腈部分變性，聯(lián)合去除高豐度蛋白進行不同的方式預處理。 2.血清樣品經(jīng)過不同預處理后，分別進行不同的CyDye染料交叉標記，然后依次進行2-D DIGE、圖像掃描，并用專用分析軟件DeCyder v6.0，比較各組樣本問蛋白點圖像差異和斑點檢出率，并評估該技術體系。 3.隨機抽取12例肝

4、內轉移和12例未轉移肝癌患者及12例正常成人血清樣品，經(jīng)過確定優(yōu)化的預處理方式后，用不同的CyDye染料交叉標記，依次進行2一D DIGE以分離蛋白質、圖像分析以尋找表達差異的蛋白點，對表達差異的蛋白點進行MALDI-TOF/TOF-MS分析，獲得PMF，檢索MASCOT數(shù)據(jù)庫鑒定蛋白。 4.用經(jīng)典的分子牛物學技術Western Blot，對有意義的差異蛋白進行再驗證。 結論: 1.成功建立并優(yōu)化了血清蛋白質組學

5、技術體系，證實了該技術平臺是篩選疾病相關血清標志物的有力工具。 2.建立了肝癌轉移相關的血清蛋白質指紋圖譜(PMF)，成功鑒定出30個差異性蛋白質，共22種肝癌轉移相關血清蛋白質，可能參與了肝癌轉移的過程。 3.初步確定并驗證了CK9、CK10和C4A三個差異蛋白質與肝癌轉移密切相關，可作為肝癌轉移相關潛在的血清標志物，值得進一步研究。 本課題的特色和創(chuàng)新點： 1.運用高通量、高效率的比較蛋白質組學的技術

6、手段，優(yōu)化了血清樣本的預處理，首次從肝內轉移和未轉移肝癌患者以及正常人血清中篩選并鑒定出22種差異蛋白。 2.部分差異蛋白在肝癌的轉移中為首次報道，并且首次驗證差異蛋白CK9,CK10,C4A在肝內轉移患者血清中的變化，可能在肝癌的侵襲和轉移中發(fā)揮作用。 本課題的潛在應用價值： 1.篩檢出的部分差異蛋白可能成為肝癌轉移復發(fā)的診斷的生物標志物和預警判斷指標，以豐富肝癌診療指標的選擇和組合，并有助于制定和完善肝癌肝移