雌激素受體GPR30在乳腺癌細胞生長中的作用.pdf

1、背景與目的: 雌激素參與調(diào)節(jié)大量的生物學過程，傳統(tǒng)的雌激素效應是作為轉錄因子通過ERα，ERβ和雌激素受體相關蛋白γ發(fā)揮作用。不同于傳統(tǒng)的雌激素核受體，新的雌激素膜受體GPR30則通過細胞內(nèi)第二信使途徑發(fā)揮效應，同時與抗雌激素表現(xiàn)出明顯的親和力。研究表明GPR30參與了細胞增殖、周期以及凋亡的調(diào)節(jié)。作為激素敏感組織之一，雌激素不僅促進乳腺的發(fā)育，而且刺激乳腺癌的生長。那么這一新的雌激素受體在乳腺癌中發(fā)揮什么作用呢？為此，本研究以

2、乳腺癌細胞SKBR3為研究對象，以干擾GPR30的表達為手段，分析GPR30表達與腫瘤細胞生長的相關性。 方法: 運用siRNA干擾SKBR3細胞中GPR30的表達，給予17β-E2、EGF、SB202190干擾細胞生長，運用半定量RT-PCR檢測各處理組GPR30 mRNA的表達水平，以MTT法檢測干擾GPR30表達后細胞生長的變化。 結果: 1.成功構建了2個重組質粒pshRNAGPR301和pshR

3、NAGPR302，并應用GenEscortTMⅠ成功轉染至乳腺癌細胞株SKBR3，RT-PCR結果顯示GPR30基因在mRNA水平被顯著抑制，其表達率分別為正常細胞的64.25％和54.24％。 2.使用17β-E2、EGF、SB202190干擾細胞生長，1小時和24小時半定量RT-PCR檢測GPR30表達，結果顯示各組GPR30表達無差異；使用MTT檢測細胞生長，結果顯示：17β-E2對細胞生長無影響，EGF發(fā)揮了促生長作用，