潰結(jié)安康湯對潰瘍性結(jié)腸炎大鼠模型影響及機制研究.pdf

1、目的：通過中藥潰結(jié)安康湯對潰瘍性結(jié)腸炎（UC）大鼠模型影響及機制研究，從潰瘍性結(jié)腸炎大鼠模型的一般狀態(tài)、肉眼觀察大鼠結(jié)腸組織、顯微鏡觀察（HE染色）大鼠結(jié)腸組織、大鼠腸電圖（頻率和波幅）、大鼠結(jié)腸組織氧自由基（MDA含量和SOD活性）、大鼠結(jié)腸組織炎性細(xì)胞因子（IL-1β、IL-10和TNF-α）的含量及蛋白表達(dá)、大鼠結(jié)腸組織表皮生長因子（EGF）的含量及mRNA表達(dá)等方面，探討中藥潰結(jié)安康湯治療潰瘍性結(jié)腸炎大鼠模型的治療效果，并從多環(huán)

2、節(jié)、多層次探討其作用的可能靶點及機制，以期為中醫(yī)藥治療潰瘍性結(jié)腸炎提供實驗依據(jù)。
　　 材料與方法：
　　 1．模型制作方法
　　 健康Wistar大鼠60只，雌雄各半，雌雄分籠飼養(yǎng)，體重180-220g。適應(yīng)性喂養(yǎng)1周，確定大鼠健康后，隨機分為對照組（12只），造模組（48只）。造模組采用TNBS/乙醇法造模，對照組則等量生理鹽水灌腸。3d后，隨機抽取1只對照組大鼠和4只造模組大鼠，麻醉后，取結(jié)腸，進(jìn)行組織形態(tài)

3、學(xué)觀察確認(rèn)造模是否成功。
　　 2．分組
　　 對照組大鼠11只，為正常組；造模組大鼠隨機分為4組：模型組、柳氮磺胺吡啶（SASP）組、補脾益腸丸組、潰結(jié)安康湯組，每組11只（各組大鼠均雌雄分籠飼養(yǎng)）。
　　 3．給藥
　　 從造模第4d開始，根據(jù)人與大鼠之間等效劑量換算，補脾益腸丸組大鼠按1.62g/kg劑量，給予濃度為0.108g/ml補脾益腸丸3ml，日一次灌胃，連續(xù)灌胃21d； SASP組大鼠按0

4、.36g/kg劑量，給予濃度0.024g/ml SASP3ml，日一次灌胃，連續(xù)灌胃21d；潰結(jié)安康湯組大鼠按18g/kg劑量，給予濃度1.2g/ml潰結(jié)安康湯3ml，日一次灌胃，連續(xù)灌胃21d。正常組和模型組大鼠用生理鹽水3ml，日一次灌胃，連續(xù)灌胃21d。
　　 4．灌流與取材
　　 4.1灌流
　　 各組大鼠于灌胃第21d晚，禁食不禁水，第22d，腹腔注射10％水合氯醛（0.2ml/100g）將各組大鼠麻醉

5、，把大鼠固定于灌流臺上，剖開大鼠胸腔，經(jīng)左心室快速灌流37℃生理鹽水30-50ml，繼之灌注4℃的4％多聚甲醛溶液（PBS配制，PH7.2-7.4）30-50ml。
　　 4.2取材
　　 灌流后，切開腹腔，從肛門以上2cm處，向上截取大鼠結(jié)腸組織6-8cm，沿大鼠腸系膜緣縱向剖開腸腔，用生理鹽水沖洗干凈，然后將截取的大鼠結(jié)腸組織向上平鋪，用大頭針固定結(jié)腸組織，肉眼觀察大鼠結(jié)腸粘膜組織損傷情況。然后在病變最嚴(yán)重處剪取大鼠

6、結(jié)腸腸管1cm左右，用干冰速凍，放至-80℃冰箱冷凍保存。再留取大鼠結(jié)腸組織病變最明顯處組織若干，置于10％甲醛溶液中后固定48小時以上，再將結(jié)腸組織修成1×0.5cm的小塊，梯度酒精脫水，經(jīng)石蠟包埋后，組織橫切片，用涂有多聚賴氨酸的載玻片撈片后，送遼寧中醫(yī)藥大學(xué)教學(xué)實驗中心檢測。
　　 結(jié)果：
　　 1．大鼠一般狀態(tài)
　　 潰結(jié)安康湯組、補脾益腸丸組、SASP組：經(jīng)潰結(jié)安康湯、補脾益腸丸、SASP灌胃給藥10d

7、，各組大鼠精神狀態(tài)明顯好轉(zhuǎn)，毛發(fā)略顯光澤，活動量增加，進(jìn)食量明顯增加，大便性狀有好轉(zhuǎn)，膿血便逐漸減少。
　　 21d后治療各組大鼠上述癥狀均有顯著改善，粘液、膿血便明顯減少，但與正常組比較，上述癥狀仍然略差，其中潰結(jié)安康湯組和SASP組恢復(fù)最好；模型組大鼠仍可見懶動、食量少、便稀、皮毛不澤等表現(xiàn)。
　　 2．肉眼觀察
　　 模型組大鼠結(jié)腸粘膜組織損傷肉眼觀積分與正常組比較，肉眼觀積分明顯增高，經(jīng)統(tǒng)計學(xué)處理，具有統(tǒng)

8、計學(xué)意義；潰結(jié)安康湯組、補脾益腸丸組、SASP組與模型組比較，經(jīng)統(tǒng)計學(xué)處理，肉眼觀積分明顯下降，具有統(tǒng)計學(xué)意義；潰結(jié)安康湯組與補脾益腸丸組比較，肉眼觀積分下降，經(jīng)統(tǒng)計學(xué)處理，具有統(tǒng)計學(xué)意義；潰結(jié)安康湯組與SASP組比較，肉眼觀積分無明顯差異，經(jīng)統(tǒng)計學(xué)處理，無統(tǒng)計學(xué)意義。
　　 3．光學(xué)顯微鏡觀察
　　 模型組大鼠結(jié)腸組織病理積分與正常組比較，病理積分明顯升高，經(jīng)統(tǒng)計學(xué)處理，具有統(tǒng)計學(xué)意義；潰結(jié)安康湯組、補脾益腸丸組、SA

9、SP組與模型組比較，病理積分明顯下降，經(jīng)統(tǒng)計學(xué)處理，具有統(tǒng)計學(xué)意義；潰結(jié)安康湯組與補脾益腸丸組比較，病理積分下降，經(jīng)統(tǒng)計學(xué)處理，具有統(tǒng)計學(xué)意義；潰結(jié)安康湯組與SASP組比較，病理積分無明顯差異，經(jīng)統(tǒng)計學(xué)處理，無統(tǒng)計學(xué)意義。
　　 4．大鼠腸電圖
　　 模型組腸電圖出現(xiàn)雙向改變，與正常組比較，腸電圖頻率明顯增快、幅值明顯增大，經(jīng)統(tǒng)計學(xué)處理，具有統(tǒng)計學(xué)意義；潰結(jié)安康湯組、補脾益腸丸組、SASP組與模型組比較，腸電圖頻率明顯下

10、降、振幅明顯下降，經(jīng)統(tǒng)計學(xué)處理，具有統(tǒng)計學(xué)意義；潰結(jié)安康湯組腸電圖與補脾益腸丸組比較，腸電圖頻率下降、振幅下降，經(jīng)統(tǒng)計學(xué)處理，具有統(tǒng)計學(xué)意義；潰結(jié)安康湯組與SASP組比較，腸電圖頻率下降，經(jīng)統(tǒng)計學(xué)處理，具有統(tǒng)計學(xué)意義，而腸電圖振幅下降無明顯差異，經(jīng)統(tǒng)計學(xué)處理，無統(tǒng)計學(xué)意義。
　　 5．氧自由基
　　 模型組結(jié)腸組織氧自由基與正常組比較，丙二醛（MDA）含量明顯升高、超氧化物歧化酶（SOD）活性明顯降低，經(jīng)統(tǒng)計學(xué)處理，具有

11、統(tǒng)計學(xué)意義；潰結(jié)安康湯組、補脾益腸丸組、SASP組與模型組比較，MDA含量明顯下降、SOD活性明顯增強，經(jīng)統(tǒng)計學(xué)處理，具有統(tǒng)計學(xué)意義；潰結(jié)安康湯組與補脾益腸丸組比較，MDA含量下降、SOD活性增強，經(jīng)統(tǒng)計學(xué)處理，具有統(tǒng)計學(xué)意義；潰結(jié)安康湯組與SASP組比較，MDA含量下降，經(jīng)統(tǒng)計學(xué)處理，具有統(tǒng)計學(xué)意義，而SOD活性差異不大，經(jīng)統(tǒng)計學(xué)處理，無統(tǒng)計學(xué)意義。
　　 6．炎性細(xì)胞因子
　　 模型組結(jié)腸組織炎性細(xì)胞因子與正常組比較

12、，致炎細(xì)胞因子IL-1β、TNF-α含量均明顯增高，IL-1β、TNF-α的蛋白表達(dá)也均明顯增高，經(jīng)統(tǒng)計學(xué)處理，具有統(tǒng)計學(xué)意義，抗炎細(xì)胞因子IL-10含量明顯下降，其蛋白表達(dá)也明顯下降，經(jīng)統(tǒng)計學(xué)處理，具有統(tǒng)計學(xué)意義。潰結(jié)安康湯組、補脾益腸丸組、SASP組與模型組比較，IL-1β、TNF-α含量均明顯下降，IL-1β、TNF-α的蛋白表達(dá)也均明顯下降，經(jīng)統(tǒng)計學(xué)處理，具有統(tǒng)計學(xué)意義，IL-10含量明顯升高，其蛋白表達(dá)也明顯升高，經(jīng)統(tǒng)計學(xué)處理

13、，具有統(tǒng)計學(xué)意義；潰結(jié)安康湯與補脾益腸丸組比較，IL-1β、TNF-α含量均下降，IL-1β、TNF-α的蛋白表達(dá)也均下降，經(jīng)統(tǒng)計學(xué)處理，具有統(tǒng)計學(xué)意義，IL-10含量升高，其蛋白表達(dá)也升高，經(jīng)統(tǒng)計學(xué)處理，具有統(tǒng)計學(xué)意義；潰結(jié)安康湯組與SASP組比較，IL-1β含量和IL-1β蛋白表達(dá)均差異不大，經(jīng)統(tǒng)計學(xué)處理，無統(tǒng)計學(xué)意義，TNF-α含量和TNF-α蛋白表達(dá)均下降，經(jīng)統(tǒng)計學(xué)處理，具有統(tǒng)計學(xué)意義，IL-10含量和IL-10蛋白表達(dá)均升高，

14、經(jīng)統(tǒng)計學(xué)處理，具有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　 7．表皮生長因子
　　 模型組結(jié)腸組織表皮生長因子與正常組比較，EGF含量明顯下降，EGFmRNA光密度明顯下降、EGFmRNA強度/內(nèi)參明顯下降，經(jīng)統(tǒng)計學(xué)處理，具有統(tǒng)計學(xué)意義；潰結(jié)安康湯組、補脾益腸丸組、SASP組與模型組比較，EGF含量明顯升高，EGFmRNA光密度明顯升高、EGFmRNA強度/內(nèi)參明顯升高，經(jīng)統(tǒng)計學(xué)處理，具有統(tǒng)計學(xué)意義；潰結(jié)安康湯組與補脾益腸丸組，EGF含量升高

15、，EGFmRNA光密度升高、EGFmRNA強度/內(nèi)參升高，經(jīng)統(tǒng)計學(xué)處理，具有統(tǒng)計學(xué)意義。潰結(jié)安康湯組與SASP組比較，EGF含量升高，EGFmRNA光密度升高、EGFmRNA強度/內(nèi)參升高，經(jīng)統(tǒng)計學(xué)處理，具有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　 結(jié)論：
　　 1．肉眼觀察潰瘍性結(jié)腸炎大鼠模型有程度不同的粘膜的充血、水腫、糜爛和潰瘍，光學(xué)顯微鏡下見結(jié)腸各層組織出現(xiàn)炎性細(xì)胞浸潤，證明潰瘍性結(jié)腸炎模型制作成功。
　　 2．潰結(jié)安康湯對潰

16、瘍性結(jié)腸炎大鼠模型具有顯著的減輕一般狀態(tài)、減輕粘膜的充血、水腫、促進(jìn)潰瘍愈合，促進(jìn)炎性細(xì)胞吸收的作用。
　　 3．潰結(jié)安康湯對潰瘍性結(jié)腸炎大鼠模型腸電圖頻率和振幅有明顯降低的作用，從而減輕腸道運動，使腹瀉減輕。
　　 4．潰結(jié)安康湯對潰瘍性結(jié)腸炎大鼠模型可以增加結(jié)腸組織SOD活性，清除氧自由基，抑制脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，降低MDA含量，減輕結(jié)腸組織損傷。
　　 5．潰結(jié)安康湯對潰瘍性結(jié)腸炎大鼠模型通過下調(diào)致炎細(xì)胞因子和