廣州管圓線蟲(chóng)感染BALB-c小鼠脾臟T淋巴細(xì)胞亞群和血清抗體的變化.pdf

1、廣州管圓線蟲(chóng)作為一種新發(fā)傳染病的病原，主要侵犯中樞神經(jīng)系統(tǒng)，引起嗜酸性粒細(xì)胞增多性腦膜腦炎或腦膜炎(Eosinophilic Meningoencephalitis，EM)。廣州管圓線蟲(chóng)病主要流行于太平洋、印度洋某些島嶼和東南亞、中國(guó)、日本等國(guó)家；到目前為止，全世界已有超過(guò)3000例報(bào)道。了解廣州管圓線蟲(chóng)感染后產(chǎn)生的免疫應(yīng)答及與宿主相互作用，對(duì)于我們了解宿主抗損害作用的特點(diǎn)、蟲(chóng)體的致病機(jī)制和免疫學(xué)診斷等有重要意義。但由于目前對(duì)于廣州管圓

2、線蟲(chóng)感染的基礎(chǔ)免疫學(xué)研究很少，使醫(yī)學(xué)界對(duì)宿主免疫應(yīng)答機(jī)制和特點(diǎn)的了解非常有限。嚴(yán)重制約了廣州管圓線蟲(chóng)防治研究工作的深入開(kāi)展。而脾臟是哺乳動(dòng)物最大的外周免疫器官和血源性抗原最主要的免疫應(yīng)答場(chǎng)所，也是包括淋巴細(xì)胞在內(nèi)許多免疫細(xì)胞定居區(qū)域。感染后脾臟淋巴細(xì)胞學(xué)的改變能較好地反映宿主對(duì)寄生蟲(chóng)免疫應(yīng)答的特點(diǎn)，因此，本研究以 BALB/c小鼠為動(dòng)物模型，采用流式細(xì)胞術(shù)和酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)等方法對(duì)其感染廣州管圓線蟲(chóng)后脾臟 T淋巴細(xì)胞亞群及

3、血清抗體水平的變化進(jìn)行了觀察。
　　研究目的:
　　觀察小鼠感染廣州管圓線蟲(chóng)后脾臟T淋巴細(xì)胞亞群、細(xì)胞因子變化特點(diǎn)以及血清中特異性IgG、IgE抗體水平的動(dòng)態(tài)變化。
　　研究方法：
　　1、模型建立：將30只BALB/c小鼠隨機(jī)分成對(duì)照組、實(shí)驗(yàn)1組、實(shí)驗(yàn)2組，每組各10只鼠。從感染的褐云瑪瑙螺分離廣州管圓線蟲(chóng)第3期幼蟲(chóng)，經(jīng)腹腔注射感染小鼠，實(shí)驗(yàn)1組感染20條幼蟲(chóng)/鼠、實(shí)驗(yàn)2組感染40條幼蟲(chóng)/鼠。
　　2、采

4、樣和取材：分別經(jīng)尾靜脈或眼球采集感染前和感染后不同時(shí)間小鼠血液，經(jīng)離心后收集血清。于感染后第19d及第25d前后分批剖殺(處死)小鼠，分離脾細(xì)胞，制備脾細(xì)胞懸液。經(jīng)細(xì)胞計(jì)數(shù)后，將制備的脾細(xì)胞懸液濃度調(diào)整為2×106/ml。
　　3、脾細(xì)胞流式檢測(cè)：取脾細(xì)胞懸液1ml，加入PMA及離子霉素(Ionomycin)于37℃，5％二氧化碳細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)1h，加入BFA后繼續(xù)培養(yǎng)4h-5h，培養(yǎng)細(xì)胞經(jīng)洗滌后加4%甲醛固定，加含通透劑Sapo

5、nin的緩沖液，4℃過(guò)夜。將細(xì)胞分裝入流式管中，加入相應(yīng)的熒光標(biāo)記單克隆抗體。流式細(xì)胞儀檢測(cè)小鼠脾臟T淋巴細(xì)胞及其亞類(lèi)的含量。
　　4、脾細(xì)胞培養(yǎng)上清中細(xì)胞因子檢測(cè)：取脾臟細(xì)胞懸液1ml，加入PMA及離子霉素，分別加入細(xì)胞培養(yǎng)板中，于37℃，5%二氧化碳細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)72 h后取出并保存于-80℃。雙抗夾心ELISA法檢測(cè)脾細(xì)胞培養(yǎng)上清中細(xì)胞因子IL-4和IL-17水平。
　　5、血清特異性抗體檢測(cè)：用廣州管圓線蟲(chóng)成蟲(chóng)抗原包

6、被96孔ELISA板，用間接ELISA法檢測(cè)小鼠未感染和感染后不同時(shí)間血清中特異性IgG和IgE的水平并觀察其動(dòng)態(tài)變化。
　　研究結(jié)果:
　　1、實(shí)驗(yàn)感染組小鼠脾臟CD4+T淋巴細(xì)胞比例較對(duì)照組明顯升高，CD8+T淋巴細(xì)胞比例在感染后雖有升高，但與對(duì)照組差異不顯著。
　　2、與對(duì)照組比較，實(shí)驗(yàn)感染組小鼠CD4+IL-4+T細(xì)胞比例顯著上升，而CD4+IL-17+、CD4+IFN-γ+T細(xì)胞比例明顯下降。
　　3、

7、與對(duì)照組比較，實(shí)驗(yàn)感染組脾細(xì)胞培養(yǎng)上清中細(xì)胞因子IL-4水平明顯升高，而IL-17水平則明顯下降。
　　4、感染后上調(diào)性免疫因子包括CD4+、CD8+、CD4+IL-4+T細(xì)胞和細(xì)胞因子IL-4水平均隨著感染程度的增加而上升，而下調(diào)性免疫因子包括CD4+IFN-γ+T細(xì)胞和細(xì)胞因子IL-17檢測(cè)值則隨著感染程度的增加而下降，但差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　5、小鼠血清中特異性IgG抗體水平于感染后第5d時(shí)已開(kāi)始小幅度升高，且隨時(shí)

8、間的推移，在波動(dòng)變化中水平逐漸上升，在感染后第20d前后達(dá)到第一個(gè)高峰。
　　6、小鼠感染后血清中特異性IgE抗體水平較未感染有所上升，且在感染后第10~15d期間抗體水平達(dá)一峰值。
　　結(jié)論：
　　1、BALB/c小鼠感染廣州管圓線蟲(chóng)后，脾臟T淋巴細(xì)胞出現(xiàn)增殖現(xiàn)象，其中CD4+T淋巴細(xì)胞增殖較CD8+T淋巴細(xì)胞更為顯著。
　　2、感染廣州管圓線蟲(chóng)后，小鼠脾臟CD4+IL-4+T淋巴細(xì)胞比例顯著上升，而CD4+I

9、L-17+、CD4+IFN-γ+T淋巴細(xì)胞比例明顯下降。
　　3、感染小鼠脾細(xì)胞在刺激劑作用下培養(yǎng)上清中細(xì)胞因子IL-4水平上升明顯，而IL-17水平則明顯下降。
　　4、不同感染程度和感染時(shí)間等因素也可對(duì)感染后脾臟T淋巴細(xì)胞亞群及其細(xì)胞因子分泌水平產(chǎn)生一定的影響。
　　5、BALB/c小鼠感染廣州管圓線蟲(chóng)后，脾臟T淋巴細(xì)胞變化特點(diǎn)為：CD4+T細(xì)胞大量增殖和Th2型細(xì)胞極化。
　　6、在體液免疫方面，血清中特異