TGF-β-,1--Smad信號通路在哮喘小鼠氣道黏液高分泌中的作用.pdf

1、本文主要從以下兩個(gè)部分展開：
　　 第一部分：
　　 目的：觀察哮喘小鼠氣道炎癥的表現(xiàn)，并證實(shí)哮喘小鼠氣道黏液高分泌的存在。方法：將20只清潔級BALB/c小鼠隨機(jī)分為2組：哮喘組（OVA組）、對照組（NS組），每組10只。哮喘組用卵蛋白（OVA）致敏和激發(fā)制作哮喘模型，對照組用生理鹽水致敏和激發(fā)。檢測支氣管肺泡灌洗液（BALF）中細(xì)胞總數(shù)和細(xì)胞分類計(jì)數(shù)，采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）檢測BALF中的IL-4和腫瘤壞

2、死因子-α（TNF-α）水平，用阿爾辛藍(lán)-過碘酸雪夫氏染色（AB-PAS）氣道杯狀細(xì)胞、用免疫組織化學(xué)檢測氣道組織中Muc5ac蛋白的表達(dá)及實(shí)時(shí)熒光定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶（RT-PCR）檢測Muc5ae mRNA在氣道組織的表達(dá)。結(jié)果：OVA組小鼠BALF中的細(xì)胞總數(shù)、淋巴細(xì)胞和嗜酸性粒細(xì)胞高于NS組小鼠（P均<0.01），BALF中IL-4和TNF-α水平、氣道杯狀細(xì)胞陽性著色面積及氣道組織中Muc5ac蛋白及其mRNA較NS組升高（P均<

3、0.01）。結(jié)論：哮喘小鼠存在氣道炎癥及氣道黏液高分泌。
　　 第二部分：
　　 目的：觀察TGF-β1/Smad信號通路在支氣管哮喘小鼠氣道黏液高分泌中的作用。方法：清潔級BALB/c.小鼠40只，隨機(jī)分為5組：正常對照組（NS組）8只，哮喘組（OVA組）8只，地塞米松干預(yù)組（OVA+DEX組）8只，溶劑對照組（OVA+SJ組）8只，吡非尼酮干預(yù)組（OVA+PFD組）8只。測定BALF中細(xì)胞總數(shù)和細(xì)胞分類計(jì)數(shù)，采用酶聯(lián)

4、免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）檢測BALF中的IL-4和TNF-α水平，用阿爾辛藍(lán)-過碘酸雪夫氏染色（AB-PAS）對氣道杯狀細(xì)胞進(jìn)行染色，用免疫組織化學(xué)法檢測氣道組織Muc5ae和肺組織TGF-β1的表達(dá)及實(shí)時(shí)熒光定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶（RT-PCR）檢測Muc5ac mRNA、TGF-β1 mRNA、Smad3及Smad4在肺組織內(nèi)的表達(dá)。結(jié)果：OVA組在BALF細(xì)胞總數(shù)、嗜酸性粒細(xì)胞數(shù)及氣道杯狀細(xì)胞陽染面積及免疫組化黏蛋白Muc5ac、轉(zhuǎn)化

5、生長因子TGF-β1積分光密度值及肺組織Muc5ac mRNA、TGF-β1 mRNA、Smad3 mRNA、Smad4mRNA表達(dá)與OVA+PFD組、NS組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均<0.01），OVA組在BALF細(xì)胞總數(shù)、嗜酸性粒細(xì)胞數(shù)及AB-PAS陽染面積及免疫組化黏蛋白Muc5ac與OVA+DEX組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均<0.01），但肺組織TGF-β1積分光密度值及TGF-β1 mRNA、Smad3 mRNA、Smad4

6、mRNA的表達(dá)水平兩組無差異性（P>0.05）。OVA+PFD組小鼠氣道杯狀細(xì)胞及氣道組織中的Muc5ac蛋白和TGF-β1及Muc5acmRNA、TGF-β1 mRNA、Smad3 mRNA、Smad4 mRNA低于OVA+DEX組（P均<0.01）。OVA組和OVA+SJ組在上述指標(biāo)則組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。結(jié)論：哮喘小鼠肺組織TGF-β1蛋白、Smad3、Smad4蛋白及其mRNA和氣道組織Muc5ac蛋白及其mRN