TSLP在哮喘小鼠氣道黏液高分泌中的作用.pdf

1、第一部分哮喘小鼠動物模型的制備
　　 目的：評價以雞卵清白蛋白(OVA)致敏和激發(fā)小鼠制備哮喘模型。
　　 方法：清潔級BALB/c小鼠20只隨機(jī)分為哮喘組(AS組)和生理鹽水對照組(NS組)，每組10只。AS組小鼠于第1、13d以O(shè)VA致敏，從第1次致敏后第19d開始以5％OVA溶液霧化激發(fā)并連續(xù)5d，末次激發(fā)24h后處死小鼠；NS組以生理鹽水代替OVA作對照，余處理同AS組。檢測兩組小鼠支氣管肺泡灌洗液(BALF)中

2、細(xì)胞總數(shù)和細(xì)胞分類計數(shù)，采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)檢測BALF白細(xì)胞介素5(IL-5)和IL-32水平的變化，蘇木素-伊紅(HE)染色觀察肺組織病理學(xué)改變，阿辛藍(lán)-過碘酸雪夫(AB-PAS)染色觀察氣道上皮杯狀細(xì)胞及黏液物質(zhì)改變，Van Gieson(VG)染色觀察氣道周圍膠原纖維增生情況，免疫組織化學(xué)(IHC)檢測肺組織中黏蛋白5ac(Muc5ac)和IL-32蛋白的表達(dá)水平，實時熒光定量逆轉(zhuǎn)錄PCR和免疫印跡法(Wester

3、n blot)分別檢測肺組織中Muc5ac mRNA和蛋白的表達(dá)水平。
　　 結(jié)果：AS組小鼠肺組織中出現(xiàn)哮喘特征性病理改變，BALF中細(xì)胞總數(shù)、嗜酸性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、中性粒細(xì)胞百分比、IL-5和IL-32水平、氣道炎癥病理評分、氣道上皮杯狀細(xì)胞及黏液物質(zhì)陽性相對著色面積、氣道周圍膠原纖維陽性相對著色面積、肺組織IL-32蛋白、Muc5ac蛋白和Muc5ac mRNA表達(dá)均高于NS組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。

4、　　 結(jié)論：以O(shè)VA致敏和激發(fā)小鼠可以成功復(fù)制哮喘小鼠動物模型；哮喘小鼠出現(xiàn)明顯的氣道炎癥、氣道上皮杯狀細(xì)胞增生/化生及氣道黏液高分泌；哮喘小鼠氣道炎癥可能導(dǎo)致氣道黏液高分泌的發(fā)生。
　　 第二部分 TSLP在哮喘小鼠氣道黏液高分泌中的作用及藥物干預(yù)的影響
　　 目的：通過應(yīng)用羅格列酮和地塞米松干預(yù)哮喘小鼠，探討胸腺基質(zhì)淋巴細(xì)胞生成素(TSLP)在哮喘小鼠氣道黏液高分泌中的作用。
　　 方法：清潔級BALB/c

5、小鼠40只隨機(jī)分成生理鹽水對照組(NS組)、哮喘組(AS組)、羅格列酮干預(yù)組(AS+ROS組)、地塞米松干預(yù)組(AS+DEX組)，各10只。AS組和NS組處理同第一部分；AS+ROS組從第1次致敏后第17d開始予羅格列酮5mg*kg-1*d-1灌胃，第19d開始，于每日霧化激發(fā)前30min給藥，連續(xù)7d，余處理同AS組；AS+DEX組于每日霧化激發(fā)前30min予地塞米松2mg/kg腹腔注射，連續(xù)5d，余處理同AS組。測定各組小鼠BALF

6、中細(xì)胞總數(shù)和細(xì)胞分類計數(shù)，采用ELISA檢測BALF中IL-5水平的變化，HE染色觀察肺組織病理學(xué)改變，AB-PAS染色觀察氣道上皮杯狀細(xì)胞及黏液物質(zhì)改變，VG染色觀察氣道周圍膠原纖維增生情況，IHC檢測肺組織中Muc5ac、TSLP、CD11c和脾組織中CD11c蛋白的表達(dá)水平，實時熒光定量逆轉(zhuǎn)錄PCR和Western blot分別檢測肺組織中Muc5ac、TSLP mRNA和蛋白的表達(dá)水平。
　　 結(jié)果：AS組BALF細(xì)胞總

7、數(shù)、嗜酸性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、中性粒細(xì)胞百分比、IL-5水平、氣道炎癥病理評分、氣道上皮杯狀細(xì)胞及黏液物質(zhì)陽性相對著色面積、氣道周圍膠原纖維陽性相對著色面積、肺組織和脾組織中CD11c蛋白、肺組織中Muc5ac、TSLP蛋白及Muc5ac、TSLP mRNA表達(dá)均較NS組、AS+ROS組、AS+DEX組增高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。
　　 結(jié)論：哮喘小鼠氣道上皮細(xì)胞中TSLP表達(dá)增高，TSLP可能通過激活CD11c+DC