TLR4-MyD88信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在哮喘小鼠氣道黏液高分泌中的作用.pdf

1、目的：觀察脂多糖(Lipopolysaccharrides,LPS)干預(yù)對(duì)哮喘小鼠氣道炎癥和氣道黏液分泌的影響。
　　 方法：清潔級(jí)BALB/c小鼠30只隨機(jī)分為三組:哮喘組(AS組)10只、脂多糖干預(yù)組(LA組)10只和正常組(NS組)10只。AS組用卵清白蛋白(ovalbumin,OVA)致敏和激發(fā)制作模型,LA組于末兩次激發(fā)前1h予以脂多糖霧化吸入,NS組用生理鹽水致敏和激發(fā)。各組小鼠支氣管肺泡灌洗液(BALF)作細(xì)胞總數(shù)

2、和白細(xì)胞分類計(jì)數(shù),ELISA法檢測(cè)。BALF中的IL-4和TNF-α水平,阿爾辛藍(lán)-過(guò)碘酸雪夫(AB-PAS)染色觀察氣道杯狀細(xì)胞及氣道黏液分泌,HE染色觀察氣道及肺部病理學(xué)的改變,分別采用熒光定量PCR、免疫組織化學(xué)(IHC)和免疫印跡法(Westernblot)檢測(cè)肺組織中黏蛋白5ac(Muc5ac)mRNA及蛋白水平的表達(dá)。
　　 結(jié)果：AS組和LA組小鼠BALF中的細(xì)胞總數(shù)、嗜酸性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞及單核細(xì)胞百分比、IL-

3、4和TNF-α水平、肺組織AB-PAS陽(yáng)染面積、Muc5acmRNA和蛋白表達(dá)高于NS組小鼠(P＜0.01);LA組小鼠BALF中的細(xì)胞總數(shù)、嗜酸性粒細(xì)胞(EOS)、淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞百分比,IL-4和TNF-α水平、肺組織AB-PAS陽(yáng)染面積、Muc5acmRNA和蛋白表達(dá)高于AS組小鼠(P＜0.05)。
　　 結(jié)論：LPS可加重哮喘小鼠氣道慢性變應(yīng)性炎癥和氣道黏液高分泌;以5％OVA霧化吸入進(jìn)行激發(fā)可制備較為理想的表現(xiàn)為氣道

4、慢性炎癥與氣道黏液高分泌的小鼠哮喘模型。
　　 目的：觀察多粘菌素B(PMB)、SB203580及白藜蘆醇(RES)干預(yù)對(duì)哮喘組小鼠肺組織Toll樣受體4(TLR4)、IL-5和氣道Muc5acmRNA及蛋白表達(dá)的影響,探討TLR4/MyD88信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在哮喘小鼠氣道Muc5ac表達(dá)中的作用及機(jī)制。
　　 方法：清潔級(jí)BALB/c雄性小鼠80只,隨機(jī)分成正常對(duì)照組(NS組)、哮喘組(AS組)、LPS干預(yù)組(LA組)、地

5、塞米松干預(yù)組(DEX組)、PMB干預(yù)組(PMB組)、SB203580干預(yù)組(SB組)、RES干預(yù)組(RES組)及二甲基亞砜(DMSO)組(DMSO組),各10只。測(cè)定BALF中細(xì)胞總數(shù)和白細(xì)胞分類計(jì)數(shù),采用ELISA檢測(cè)BALF中的IL-4和TNF-α水平,AB-PAS觀察氣道杯狀細(xì)胞增生及氣道黏液物質(zhì)改變,HE染色觀察氣道及肺組織病理學(xué)改變,熒光定量PCR檢測(cè)Muc5acmRNA、TLR4mRNA、IL-5mRNA在肺組織內(nèi)的表達(dá),免

6、疫組化(IHC)與免疫印跡法(Westernblot)檢測(cè)肺組織Muc5ac及TLR4蛋白表達(dá)的變化。
　　 結(jié)果：LA組BALF細(xì)胞總數(shù)、嗜酸性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞計(jì)數(shù)、IL-4及TNF-α水平、AB-PAS陽(yáng)染面積、Muc5acmRNA及TLR4mRNA水平、Muc5ac及TLR4IOD較DEX組、PMB組、SB組、RES組增高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01),與DMSO組比較,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05);DE