Mortalin與α-synuclein相互作用的體外研究.pdf

1、背景:帕金森病(PD)是人類常見的神經(jīng)退行性疾病之一,其主要病理特征是中腦黑質(zhì)致密部多巴胺能神經(jīng)元的選擇性變性死亡以及在殘存的神經(jīng)元胞漿中出現(xiàn)以α-synuclein(α-SYN)為主要成分的淀粉樣蛋白包涵體--Lewy小體。已有大量的研究證據(jù)表明α-SYN的異常聚集在PD的發(fā)病和Lewy小體的形成中發(fā)揮了關(guān)鍵作用。另一個與PD的發(fā)病密切相關(guān)的蛋白DJ-1,則對α-SYN的異常聚集具有抑制作用,但目前對于α-SYN與DJ-1之間是否存在

2、直接的相互作用還存在爭議。利用蛋白質(zhì)組學(xué)的技術(shù)分別尋找與α-SYN和DJ-1相互作用的蛋白中,發(fā)現(xiàn)了一個共同的蛋白一線粒體應(yīng)激蛋白—mortalin,進一步的研究發(fā)現(xiàn)mortalin在PD病人腦黑質(zhì)部位的線粒體富集的組分中的表達較對照組顯著下降,在細胞漿中顯著增多。在過表達mortalin的多巴胺能細胞系中,線粒體復(fù)合物Ⅰ抑制劑---魚藤酮(帕金森病的常用致毒劑)誘導(dǎo)后細胞毒性增強,相反在抑制mortalin表達后,魚藤酮誘導(dǎo)的細胞毒性

3、反而降低,提示mortalin在調(diào)節(jié)魚藤酮誘導(dǎo)的細胞毒性中起到重要作用。最新的研究結(jié)果表明,mortalin可能在Lewy小體的進行性發(fā)展中發(fā)揮了重要作用。這些結(jié)果都提示mortalin可能在PD的發(fā)展中發(fā)揮重要的作用,但是mortalin在PD發(fā)病機制中的具體作用有待進一步研究。目的:(1)進一步明確mortalin與α-SYN之間是否存在體外相互作用;(2)如果兩者存在相互作用,進一步明確α-SYN的兩個主要致病突A53T、A30P

4、對于mortalin與α-SYN的體外相互作用有無影響。方法(1)構(gòu)建α-SYN的WT及A53T、A30P突變的GST融合蛋白表達載體;(2)表達純化GST融合蛋白;(3)運用GST Pull-down的方法沉淀大鼠腦組織中的mortalin,并用Westernblotting檢測,半定量比較WT與突變型α-SYN與mortalin之間相互作用有無區(qū)別,來判斷A53T、A30P突變對于α-SYN與mortalin的相互作用有無影響。結(jié)果