辛伐他汀與胺碘酮相互作用的體外研究.pdf

1、目的： 細胞色素P450酶(Cytochrome P450，CYPs)是一類含有亞鐵血紅素的超家族酶，能催化廣泛化合物的氧化反應。這些酶的重要作用之一就是清除脂溶性外源性化合物，包括環(huán)境中的毒物和藥物。眾所周知，有許多藥物能調節(jié)CYPs的活性，因此能改變聯(lián)合服用的其它藥物的藥代動力學。這就是所謂的代謝水平的藥物-藥物相互作用(Drug—drug interaction，DDI)。相互作用的結果表現(xiàn)為藥物治療效果被減弱或增高達致死

2、性的毒性作用不等。在這一超家族中，CYP3A參與了臨床上約50％藥物的代謝，對CYP3A活性的影響將導致臨床上出現(xiàn)嚴重的藥物相互作用。在臨床實踐中，由于患者合并癥和合并用藥種類多樣性以及臨床應用的長期性，使發(fā)生藥物相互作用的可能性也隨之增加。辛伐他汀(Simvastatin，SV)是3-羥-3-甲基戊二酸輔酶A (HMG-CoA)還原酶抑制劑，即通常所說的他汀類(Statins)藥物之一，被廣泛應用于高血脂和心血管事件的預防與治療，它是

3、CYP3A4的底物。胺碘酮(Amiodarone，AMD)是目前應用最廣泛的有效的抗心律失常藥物，主要也經(jīng)過CYP3A4代謝。曾有體內研究表明胺碘酮增加血漿中辛伐他汀及其代謝產物辛伐他汀酸的藥時曲線下面積(Area under the plasmaconcentration-time curve，AUC)，但相互作用的主要機制還有待于明確。本研究在人肝微粒體(Human liver microsome，HLM)水平，以辛伐他汀為探針底物

4、，研究胺碘酮對細胞色素3A4(CYP3A4)活性的影響，利用體外的研究來解釋臨床上觀察到的胺碘酮與辛伐他汀的相互作用，從而探討體內相互作用的可能機制，并預測體內相互作用的可能性。 方法： 實驗分三步： 1．應用高效液相色譜(High performance liquidchromatography，HPLC)檢測辛伐他汀及其代謝產物。建立體外檢測辛伐他江色譜條件，體外用HLM單獨孵育辛伐他汀，確立反應所需HLM的

5、濃度和孵育時間，以保證實驗在其線性范圍內進行； 2．胺碘酮對CYP3A4抑制作用的研究 1)預孵依賴的抑制實驗：不同濃度胺碘酮(0-50μM)經(jīng)HLM及還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(Reduced form of nicotinamide-adenine dinucleotide phosphate，NADPH)代謝，產生代謝產物后再與辛伐他汀共同孵育，在不同預孵時間(0和30min)下對CYP3A4的抑制，并計算酶活

6、性抑制50％時抑制劑濃度(Inihibition Concentration 50，IC50)； 2)預孵時間依賴和濃度依賴實驗：不同濃度胺碘酮(0-50μM)在HLM中對CYP3A4的探針底物辛伐他汀代謝的影響。固定胺碘酮濃度，在不同預孵時間(0-20min)下測定辛伐他汀代謝產物量的變化，CYP3A4對辛伐他汀代謝活性用產物峰面積與內標峰面積之比表示，以無抑制劑存在時的活性做對照，兩者之比為不同預孵時間下百分比活性，以百分比

7、活性的自然對數(shù)對預孵時間作線性擬合，直線的斜率為一個濃度胺碘酮的表觀滅活速率(kobs)；依次類推可求出不同濃度(0，2，5，25，50μM)胺碘酮的kobs： 3)通過不同濃度抑制劑和抑制劑不同預孵時間下CYP3A4對辛伐他汀代謝活性的變化，探討兩者相互作用的主要途徑； 3．利用不同濃度下kobs的倒數(shù)對抑制劑濃度的倒數(shù)進行雙倒數(shù)作圖，計算不可逆抑制(Mechanism-based inhibition，MBI)的兩個

8、參數(shù)：1/2最大滅活速率時抑制劑濃度(KI)和最大滅活速率常數(shù)(kinact)，從而利用方程計算在抑制劑存在的情況下辛伐他汀藥時曲線下面積(AUC)的變化倍數(shù)，從而預測體內相互作用的可能性。 結果： 1．胺碘酮經(jīng)過NADPH等必需因子在HLM體外代謝，即預孵代謝生成產物后，胺碘酮對CYP3A4的抑制明顯增強，說明胺碘酮對CYP3A4的抑制具有NADPH依賴性。但經(jīng)過預孵后，抑制CYP3A4活性達到50％時的抑制劑濃度(I

9、nhibition Concentration 50，IC50)仍大于50μM，說明胺碘酮對CYP3A4的抑制能力較弱，即需要至少50μM以上的胺碘酮才能抑制一半的CYP3A4的活性； 2．隨著預孵時間的延長，固定濃度胺碘酮對CYP3A4抑制能力增強，說明胺碘酮對CYP3A4的抑制具有預孵時間依賴性； 3．固定預孵時間，隨著胺碘酮濃度的增加，其對CYP3A4的抑制也隨之增強，說明胺碘酮對CYP3A4的抑制具有濃度依賴性；

10、 4．NADPH依賴性、預孵時間依賴性和濃度依賴性是不可逆抑制的特征，以辛伐他汀為CYP3A4探針底物的研究中，胺碘酮對CYP3A4的抑制方式為不可逆性抑制； 5．利用雙倒數(shù)作圖求得KI為5.098μM， kinact為0.01 8min-1，并根據(jù)方程求出體內胺碘酮與辛伐他汀合用時，辛伐他汀的藥時曲線下面積(AUC)會增加0.76-12.63倍，胺碘酮是CYP3A4的輕度-中度不可逆抑制劑。 結論： 1