甲狀腺乳頭狀癌BRAF基因突變及表達(dá)的臨床意義研究.pdf

1、甲狀腺乳頭狀癌是最常見的甲狀腺腫瘤,約占所有甲狀腺腫瘤的80％。已有的研究證實(shí),在20%-40%的甲狀腺乳頭狀癌中檢測(cè)到特異性的RET/PTC和TRK重排,而在濾泡狀癌中則存在RAS突變及PAX8-PPARγ基因的融合。近年來(lái),許多實(shí)驗(yàn)研究了BRAF基因在乳頭狀癌及其細(xì)胞株中的突變情況,發(fā)現(xiàn)BRAF突變主要存在于甲狀腺乳頭狀癌,且突變率較高,而在良性甲狀腺病變及其他惡性甲狀腺腫瘤中未見BRAF基因的突變。RAF基因是細(xì)胞RET/PTC-

2、RAS-RAF-MEK/ERK-MAPK信號(hào)傳導(dǎo)通路中一個(gè)重要的分子,主要功能是向細(xì)胞核傳遞有絲分裂信號(hào),在調(diào)節(jié)細(xì)胞生長(zhǎng)、分裂和增殖中發(fā)揮重要作用。RAF激酶有三種亞型,A型(ARAF),B型(BRAF)和C型(CRAF),其中BRAF是一種胞質(zhì)內(nèi)的絲氨酸-蘇氨酸激酶,是激活下游信號(hào)通路的MAPK最強(qiáng)的激活劑。許多研究表明,RET/PTC-RAS-RAF-MEK/ERK-MAPK信號(hào)傳導(dǎo)通路在甲狀腺癌的形成和進(jìn)展中起到非常重要的作用。這

3、條通路被激活后,會(huì)促進(jìn)腫瘤的形成。近幾年有很多研究都集中于BRAF基因突變?cè)诩谞钕偃轭^狀癌中的作用,發(fā)現(xiàn)BRAF基因在甲狀腺乳頭狀癌中存在有生物學(xué)意義的突變,即激活性突變。突變位點(diǎn)基本都位于第15外顯子的1799位點(diǎn),胸腺嘧啶被腺嘌呤所替代,從而使編碼的氨基酸由纈氨酸變?yōu)楣劝彼?進(jìn)且導(dǎo)致信號(hào)傳導(dǎo)通路的下游基因ERK、MEK和MAPK激活或磷酸化蛋白表達(dá)水平的增高。甲狀腺乳頭狀癌BRAF基因突變陽(yáng)性率為29%-70%不等。在良性甲狀腺病變

4、如結(jié)節(jié)性甲狀腺腫和腺瘤,甚至在濾泡狀癌中均未檢測(cè)到BRAF基因的突變。
　　材料和方法：本實(shí)驗(yàn)我們收集了浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬第二醫(yī)院病理科甲狀腺腫瘤和結(jié)節(jié)性甲狀腺腫病理標(biāo)本共112例(乳頭狀癌63例,濾泡狀癌21例,甲狀腺腺瘤2例,結(jié)節(jié)性甲狀腺腫26例),進(jìn)行B-raf抗體的免疫組化檢查。并檢測(cè)其中65例標(biāo)本的BRAF基因V600E點(diǎn)突變情況(乳頭狀癌46例,濾泡狀癌6例,結(jié)節(jié)性甲狀腺腫13例)。對(duì)BRAF基因突變分析采用PCR擴(kuò)增

5、技術(shù)和擴(kuò)增產(chǎn)物直接測(cè)序方法,測(cè)序結(jié)果和基因庫(kù)進(jìn)行比對(duì)以確定有無(wú)突變。免疫組化采用Envision兩步法,陽(yáng)性結(jié)果是根據(jù)陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)占總細(xì)胞數(shù)的百分比來(lái)判斷。
　　結(jié)果：在46例乳頭狀癌中有21例檢測(cè)到BRAF基因的突變,突變陽(yáng)性率為45.7%,突變位點(diǎn)位于第15外顯子的1799位點(diǎn),所有突變均為雜合性突變。在6例濾泡狀癌和13例結(jié)節(jié)性甲狀腺腫中均未發(fā)現(xiàn)有突變。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析顯示,甲狀腺乳頭狀癌BRAF基因突變率與結(jié)節(jié)性甲狀腺腫相比較,組

6、間差異具有顯著性意義(P＜0.05)。乳頭狀癌和濾泡狀癌相比較,組間差異尚無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)(見表一)。BRAF基因突變與患者的性別、年齡、組織學(xué)類型、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和腫瘤分期無(wú)相關(guān)性(P＞0.05)(見表二)。表一65例甲狀腺病變中BRAF基因突變情況表二甲狀腺乳頭狀癌BRAF基因突變與臨床病理參數(shù)的關(guān)系(46例乳頭狀癌中有一例未進(jìn)行B-raf蛋白表達(dá)的檢測(cè))BRAF基因產(chǎn)物B-raf蛋白在甲狀腺腫瘤中的表達(dá)及與乳頭狀癌BRAF

7、基因突變的相關(guān)性研究尚鮮有報(bào)道。在本實(shí)驗(yàn)中,我們檢測(cè)到乳頭狀癌中B-raf蛋白表達(dá)陽(yáng)性率為65%(41/63),濾泡狀癌為47.6%(10/21),結(jié)節(jié)性甲狀腺腫為15.4%(4/26),甲狀腺腺瘤為0(0/14),正常甲狀腺組織為0(0/14)。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析顯示,B-raf蛋白表達(dá)在乳頭狀癌和結(jié)節(jié)性甲狀腺腫、腺瘤及正常甲狀腺組織中的差異具有顯著性意義(P＜0.05)。乳頭狀癌和濾泡狀癌組比較,B-raf蛋白表達(dá)水平無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.

8、05)(見表三)。在甲狀腺乳頭狀癌B-raf蛋白表達(dá)陽(yáng)性組中BRAF基因突變陽(yáng)性率顯著高于B-raf蛋白表達(dá)陰性組,統(tǒng)計(jì)學(xué)分析顯示在甲狀腺乳頭狀癌中B-raf蛋白表達(dá)水平與BRAF基因的突變存在正相關(guān)性(P＜0.05)(見表二)。表三B-raf蛋白在112例甲狀腺病變組織中的表達(dá)情況
　　結(jié)論：1、BRAF基因突變僅見于甲狀腺乳頭狀癌,具有一定的特異性,而在濾泡狀癌和良性甲狀腺病變未見到BRAF基因突變,提示BRAF基因突變?cè)诩谞?/p>