Purα及其蛋白復(fù)合物參與DNA損傷修復(fù)的功能研究.pdf

1、浙江理工大學(xué)學(xué)位論文原創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明：我恪守學(xué)術(shù)道德，崇尚嚴謹學(xué)風(fēng)。所呈交的學(xué)位論文，是本人在導(dǎo)師的指導(dǎo)下，獨立進行研究工作所取得的成果。除文中已明確注明和引用的內(nèi)容外，本論文不包含任何其他個人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的作品及成果的內(nèi)容。論文為本人親自撰寫，我對所寫的內(nèi)容負責(zé)，并完全意識到本聲明的法律結(jié)果由本人承擔(dān)。學(xué)位論文作者簽名：髯t)專烈日期：0臟耳之聵妞日廣IIIIII浙江理工大學(xué)碩士學(xué)位論文摘要化學(xué)耐藥性是癌癥治療中一個亟

2、待解決的重要問題。研究表明，在抗癌藥物作用下，細胞內(nèi)將產(chǎn)生大量的雙鏈斷裂，這將啟動一種高效的DNA修復(fù)機制，促進基因組重排，導(dǎo)致腫瘤細胞幸存從而引發(fā)細胞化學(xué)耐藥性。因此，深入研究DNA修復(fù)機制對攻克癌癥有著重大而實際的意義。Pura是一個與單雙鏈DNA或RNA高度親和蛋白質(zhì)。在腫瘤發(fā)生機制的相關(guān)研究中表明Pura蛋白能與pRb，E2F1等蛋白因子相互作用，因而PURA被視為一種潛在抑癌基因。另有研究表明，Pura蛋白參與某些化療藥物所產(chǎn)

3、生的DNA損傷修復(fù)過程。然而，該蛋白在損傷修復(fù)過程中的功能并不明確。此外，本實驗室前期研究發(fā)現(xiàn)體內(nèi)Pura蛋白復(fù)合物經(jīng)質(zhì)譜鑒定結(jié)果中包含Ku70／80等蛋白組分，這表明Pura可能與Ku70／80蛋白存在相互作用，并且該蛋白異聚體參與DNA雙鏈斷裂所引發(fā)的非同源末端連接過程中的功能研究已經(jīng)非常明確。因此，本文通過相關(guān)實驗研究Pura與Ku70／80蛋白是否存在相互作用，并深入地對不同抗癌藥物作用后Pura蛋白所產(chǎn)生的損傷修復(fù)機制展開相關(guān)

4、研究。本課題以穩(wěn)定高表達Pura蛋白的293T細胞株為材料，運用免疫共沉淀技術(shù)證明Pura蛋白與Ku70／80蛋白存在相互作用，進一步構(gòu)建酵母雙雜交實驗所需的pGADT7KU80、pGBKT7KU80、pGADT7KU70和pCBKT7KU70質(zhì)粒，并分別轉(zhuǎn)化酵母細胞，為后續(xù)Mating實驗做準備。Mr丌實驗在一定程度上表明高表達Pura蛋白使細胞對阿霉素和甲烷磺酸甲酯藥物的敏感性降低；免疫激光共聚焦實驗表明在阿霉素處理下，Pura蛋白