人結直腸癌裸鼠移植轉移模型構建的實驗研究.pdf

1、結直腸癌是消化道常見腫瘤，惡性程度較高，易發(fā)生淋巴性轉移和消化道種植播散。腫瘤浸潤和轉移不僅影響著臨床治療效果，也是患者腫瘤復發(fā)、死亡的主要原因，因而對結直腸癌轉移機制及其防治對策的研究是當前的重要任務。而人結直腸癌裸鼠移植轉移模型的建立是當前國內(nèi)外關注的課題，為了能更好地研究結直腸癌轉移機制和防治對策，建立穩(wěn)定、可靠、重復性好的適合動物模型是十分必要的。這可為進一步研究結直腸癌的浸潤轉移機制、藥物干預等抗轉移治療提供有效的實驗平臺，利

2、于改觀結直腸癌的預后和結局。但目前尚未構建成功較為理想的結直腸癌單純性淋巴道轉移動物模型及結直腸癌粘膜原位移植轉移模型。因此，本文從模型的角度利用人結腸癌細胞株HCT-116，研究構建人結直腸癌裸小鼠爪墊單純性淋巴道移植轉移動物模型，以及組織塊法直腸粘膜原位移植轉移動物模型的可行性具有重要的科研價值和臨床意義。 第一部分.人結直腸癌裸小鼠淋巴道轉移模型的建立 目的：建立一種簡便、可行、穩(wěn)定的人結直腸癌裸小鼠淋巴道移植轉移

3、動物模型。 方法：裸鼠爪墊皮下注射人結腸癌細胞系HCT-116細胞，分別于接種后第1、2、3、4、5、6周及第8周不同時間采集種植瘤，(膕)窩和腹股溝淋巴結(第一級)、髂血管旁淋巴結(第二級)、腎門淋巴結(第三級)以及肝、肺臟器標本，進行HE染色及免疫組化檢測人癌胚抗原(CEA)。觀察種植瘤的成瘤率、生長及淋巴結轉移情況。 結果：爪墊種植1周后成瘤率100％。瘤體在3周后成指數(shù)生長。第一級、第二級、第三級淋巴結轉移率第1

4、、2周均為O％；第3周時分別為40％、0％、0％；第4周時轉移率分別為60％、0％、0％；第5周時轉移率分別為60％、20％、0％；第6周時轉移率分別為100％、40％、0％。第8周時轉移率分別為100％、60％、20％。但以上各時點均未見肝、肺轉移。HE染色證實淋巴結有彌漫性癌細胞轉移浸潤。免疫組化染色顯示轉移灶內(nèi)CEA陽性細胞。 結論：裸鼠爪墊皮下注射人結腸癌細胞系(HCT-116)可成功建立人大腸癌淋巴道轉移模型。此模型快

5、速簡便、轉移集中、轉移率高，為研究人大腸癌淋巴道轉移機制，藥物干預等抗轉移治療提供理想的動物模型。 第二部分人結直腸癌裸小鼠直腸粘膜原位種植癌及轉移模型的建立。 目的：建立人大腸癌組織塊裸小鼠直腸粘膜原位種植癌及轉移模型，為研究結直腸癌浸潤轉移機制和抗轉移治療提供動物模型。 方法：人結腸癌細胞系HCT-116細胞注射接種于裸鼠直腸粘膜下，獲得直腸種植瘤。取該腫瘤4周瘤體制備成新鮮組織小塊，原位種植于直腸粘膜面，分

6、別于接種后第2、4、6、8、10、12周不同時間采集直腸瘤塊，直腸上動脈、腸系膜下動脈、腹主動脈旁淋巴結以及肝、肺臟器標本，進行HE染色及人癌胚抗原(CEA)免疫組化檢測。觀察種植瘤的成瘤率，生長及轉移情況。 結果：直腸粘膜組織塊法原位種植2周時成瘤率91％。腫瘤在6～12周成指數(shù)生長。直腸上動脈淋巴結、腸系膜下動脈淋巴結、腹主動脈旁淋巴結轉移率第2周時均為0％，第4周時分別為60％、20％、0％，第6周時分別為80％、60％、

7、40％，第8周時分別為100％、80％、80％，第10、12周時轉移率均為100％。于第10周、12周時見肝、肺同時均發(fā)生轉移，第10周轉移率均為20％；第12周時肝、肺轉移率均為40％。HE染色證實淋巴結有彌漫性癌細胞轉移浸潤及肝、肺有轉移癌結節(jié)。免疫組化染色顯示轉移灶內(nèi)CEA陽性細胞。 結論：裸小鼠直腸粘膜植塊法能成功構建人結直腸癌原位種植癌及轉移模型。此模型操作簡便、制模穩(wěn)定、轉移率高，且生物學行為更能模擬臨床疾病粘膜原位