人結(jié)直腸癌裸鼠移植轉(zhuǎn)移模型構(gòu)建的實驗研究.pdf

1、結(jié)直腸癌是消化道常見腫瘤，惡性程度較高，易發(fā)生淋巴性轉(zhuǎn)移和消化道種植播散。腫瘤浸潤和轉(zhuǎn)移不僅影響著臨床治療效果，也是患者腫瘤復(fù)發(fā)、死亡的主要原因，因而對結(jié)直腸癌轉(zhuǎn)移機(jī)制及其防治對策的研究是當(dāng)前的重要任務(wù)。而人結(jié)直腸癌裸鼠移植轉(zhuǎn)移模型的建立是當(dāng)前國內(nèi)外關(guān)注的課題，為了能更好地研究結(jié)直腸癌轉(zhuǎn)移機(jī)制和防治對策，建立穩(wěn)定、可靠、重復(fù)性好的適合動物模型是十分必要的。這可為進(jìn)一步研究結(jié)直腸癌的浸潤轉(zhuǎn)移機(jī)制、藥物干預(yù)等抗轉(zhuǎn)移治療提供有效的實驗平臺，利

2、于改觀結(jié)直腸癌的預(yù)后和結(jié)局。但目前尚未構(gòu)建成功較為理想的結(jié)直腸癌單純性淋巴道轉(zhuǎn)移動物模型及結(jié)直腸癌粘膜原位移植轉(zhuǎn)移模型。因此，本文從模型的角度利用人結(jié)腸癌細(xì)胞株HCT-116，研究構(gòu)建人結(jié)直腸癌裸小鼠爪墊單純性淋巴道移植轉(zhuǎn)移動物模型，以及組織塊法直腸粘膜原位移植轉(zhuǎn)移動物模型的可行性具有重要的科研價值和臨床意義。 第一部分.人結(jié)直腸癌裸小鼠淋巴道轉(zhuǎn)移模型的建立 目的：建立一種簡便、可行、穩(wěn)定的人結(jié)直腸癌裸小鼠淋巴道移植轉(zhuǎn)移

3、動物模型。 方法：裸鼠爪墊皮下注射人結(jié)腸癌細(xì)胞系HCT-116細(xì)胞，分別于接種后第1、2、3、4、5、6周及第8周不同時間采集種植瘤，(膕)窩和腹股溝淋巴結(jié)(第一級)、髂血管旁淋巴結(jié)(第二級)、腎門淋巴結(jié)(第三級)以及肝、肺臟器標(biāo)本，進(jìn)行HE染色及免疫組化檢測人癌胚抗原(CEA)。觀察種植瘤的成瘤率、生長及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況。 結(jié)果：爪墊種植1周后成瘤率100％。瘤體在3周后成指數(shù)生長。第一級、第二級、第三級淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率第1

4、、2周均為O％；第3周時分別為40％、0％、0％；第4周時轉(zhuǎn)移率分別為60％、0％、0％；第5周時轉(zhuǎn)移率分別為60％、20％、0％；第6周時轉(zhuǎn)移率分別為100％、40％、0％。第8周時轉(zhuǎn)移率分別為100％、60％、20％。但以上各時點(diǎn)均未見肝、肺轉(zhuǎn)移。HE染色證實淋巴結(jié)有彌漫性癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移浸潤。免疫組化染色顯示轉(zhuǎn)移灶內(nèi)CEA陽性細(xì)胞。 結(jié)論：裸鼠爪墊皮下注射人結(jié)腸癌細(xì)胞系(HCT-116)可成功建立人大腸癌淋巴道轉(zhuǎn)移模型。此模型快

5、速簡便、轉(zhuǎn)移集中、轉(zhuǎn)移率高，為研究人大腸癌淋巴道轉(zhuǎn)移機(jī)制，藥物干預(yù)等抗轉(zhuǎn)移治療提供理想的動物模型。 第二部分人結(jié)直腸癌裸小鼠直腸粘膜原位種植癌及轉(zhuǎn)移模型的建立。 目的：建立人大腸癌組織塊裸小鼠直腸粘膜原位種植癌及轉(zhuǎn)移模型，為研究結(jié)直腸癌浸潤轉(zhuǎn)移機(jī)制和抗轉(zhuǎn)移治療提供動物模型。 方法：人結(jié)腸癌細(xì)胞系HCT-116細(xì)胞注射接種于裸鼠直腸粘膜下，獲得直腸種植瘤。取該腫瘤4周瘤體制備成新鮮組織小塊，原位種植于直腸粘膜面，分

6、別于接種后第2、4、6、8、10、12周不同時間采集直腸瘤塊，直腸上動脈、腸系膜下動脈、腹主動脈旁淋巴結(jié)以及肝、肺臟器標(biāo)本，進(jìn)行HE染色及人癌胚抗原(CEA)免疫組化檢測。觀察種植瘤的成瘤率，生長及轉(zhuǎn)移情況。 結(jié)果：直腸粘膜組織塊法原位種植2周時成瘤率91％。腫瘤在6～12周成指數(shù)生長。直腸上動脈淋巴結(jié)、腸系膜下動脈淋巴結(jié)、腹主動脈旁淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率第2周時均為0％，第4周時分別為60％、20％、0％，第6周時分別為80％、60％、

7、40％，第8周時分別為100％、80％、80％，第10、12周時轉(zhuǎn)移率均為100％。于第10周、12周時見肝、肺同時均發(fā)生轉(zhuǎn)移，第10周轉(zhuǎn)移率均為20％；第12周時肝、肺轉(zhuǎn)移率均為40％。HE染色證實淋巴結(jié)有彌漫性癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移浸潤及肝、肺有轉(zhuǎn)移癌結(jié)節(jié)。免疫組化染色顯示轉(zhuǎn)移灶內(nèi)CEA陽性細(xì)胞。 結(jié)論：裸小鼠直腸粘膜植塊法能成功構(gòu)建人結(jié)直腸癌原位種植癌及轉(zhuǎn)移模型。此模型操作簡便、制模穩(wěn)定、轉(zhuǎn)移率高，且生物學(xué)行為更能模擬臨床疾病粘膜原位