兩種結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移模型建立方法.pdf

1、目的：結(jié)直腸癌是一種常見的嚴(yán)重威脅人類生命健康的惡性腫瘤,位居男性惡性腫瘤第四位,女性惡性腫瘤第三位,每年有超過一百萬人被新診斷為結(jié)直腸癌；近年來隨著社會(huì)經(jīng)濟(jì)的發(fā)展、生活方式的改變尤其是飲食結(jié)構(gòu)的轉(zhuǎn)變,結(jié)直腸癌的發(fā)病率與死亡率呈逐年上升的趨勢(shì)。結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移模型的建立,對(duì)于了解結(jié)直腸癌的發(fā)展、轉(zhuǎn)移的過程以及正確評(píng)估各種藥物及治療方案的療效等都具有重要意義。綠色熒光蛋白(green fluorescent protein,GFP)作為一種

2、報(bào)告基因(reportergene),受到紫外線或藍(lán)光激發(fā)時(shí)可自身催化從而形成發(fā)色結(jié)構(gòu)同時(shí)激發(fā)出綠色熒光。本研究通過脾包膜下注射法和盲腸原位種植法分別建立裸鼠肝轉(zhuǎn)移模型,比較兩種方法的優(yōu)劣,同時(shí)運(yùn)用熒光成像系統(tǒng),比較顯像的異同,為進(jìn)一步研究肝轉(zhuǎn)移模型提供方法依據(jù)。
　　 方法：⑴建立鼠SW620-GFP原代細(xì)胞株:使用酶消化法將轉(zhuǎn)染GFP的SW620瘤塊消化培養(yǎng),傳代；⑵脾包膜下注射法:將SW620-GFP細(xì)胞懸液0.25ml(

3、5*106／只)注射至裸鼠脾包膜下,建立肝轉(zhuǎn)移模型；⑶盲腸原位接種法:將含有SW620-GFP細(xì)胞的瘤塊1mm3原位種植于裸鼠盲腸壁,建立盲腸原位移植瘤；⑷體外熒光成像系統(tǒng)及熒光共聚焦顯微鏡評(píng)估轉(zhuǎn)移情況:運(yùn)用體外熒光成像系統(tǒng)及confocal系統(tǒng)評(píng)估肝臟轉(zhuǎn)移情況。
　　 結(jié)果：①成功建立表達(dá)熒光較強(qiáng)的SW620-GFP細(xì)胞；②成功建立脾包膜下裸鼠肝轉(zhuǎn)移模型；③成功建立盲腸原位結(jié)直腸腫瘤模型；④體外熒光成像系統(tǒng)可整體無創(chuàng)觀測盲腸原