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文檔簡(jiǎn)介
1、果實(shí)可溶性固形物含量是番茄(Lycopeersicumesculentum。Mill)重要的品質(zhì)性狀之一,其含量的高低對(duì)番茄果實(shí)的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值、風(fēng)味口感、實(shí)質(zhì)產(chǎn)量等方面有著重要的影響,并且在植株耐冷抗逆、果實(shí)儲(chǔ)藏、運(yùn)輸過(guò)程中的防凍等方面亦有重要作用。 利用野生番茄中提高果實(shí)可溶性固形物含量的基因?qū)τ诠麑?shí)品質(zhì)改良具有重要意義。為此國(guó)內(nèi)外研究者展開(kāi)了廣泛的研究,已從野生番茄中鑒定了38個(gè)與果實(shí)可溶性固形物有關(guān)的QTL,并建立了主效QTL
2、的近等基因系(QTL-NILs)和亞近等基因系(sub-NILs),例如TA1218就是野生多毛番茄LA1777的一個(gè)漸參系,其以普通番茄E6203為遺傳背景含有1個(gè)長(zhǎng)1。2cM來(lái)自LA1777第1染色體底端的片段,QTL分析表明該片段具有明顯提高果實(shí)可溶性固形物含量的作用。 本研究在前人研究工作的基礎(chǔ)上,以TA1218及其回交后代為主要材料,進(jìn)行分子標(biāo)記輔助選擇以及篩選優(yōu)秀育種種質(zhì)的研究,并利用cDNA-AFLP方法研究了提高
3、果實(shí)可溶性固形物QTL的材料在果實(shí)不同發(fā)育階段基因的差異性表達(dá)。目的在于:利用分子標(biāo)記輔助選擇技術(shù)手段將目的基因?qū)氲浆F(xiàn)有栽培骨干系中,消除不良基因的影響,創(chuàng)造新的育種種質(zhì)資源;通過(guò)基因差異性表達(dá)鑒定和分離與果實(shí)可溶性固形物相關(guān)的TDF以及進(jìn)行生物信息學(xué)分析,研究相關(guān)基因在不同發(fā)育階段的表達(dá)情況和功能信息,并初步探討果實(shí)可溶性固形物積累的機(jī)制。主要結(jié)果如下: (1)對(duì)4個(gè)RFLP標(biāo)記進(jìn)行了CAPS標(biāo)記轉(zhuǎn)化分析,其中TG161和T
4、G237成功轉(zhuǎn)化為CAPS標(biāo)記,表明RFLP標(biāo)記可以轉(zhuǎn)化為易于操作、效率高、成本低的CAPS標(biāo)記。研究結(jié)果對(duì)于番茄的快速遺傳分析,特別是在分子育種中對(duì)大量材料進(jìn)行遺傳鑒定時(shí)具有較大的應(yīng)用價(jià)值。 (2)利用72對(duì)EcorI/MseI引物對(duì)TA1218、E6203及其F1代進(jìn)行了AFLP引物篩選,沒(méi)有篩選到符合多態(tài)性要求的AFLP引物。 (3)利用2個(gè)CAPS標(biāo)記TG161和TG237對(duì)TA1218和9706的BC1群體進(jìn)行
5、分子標(biāo)記分析,并結(jié)合每個(gè)單株的可溶性固形物含量進(jìn)行標(biāo)記型和表現(xiàn)型統(tǒng)計(jì)分析。TG161和TG237兩個(gè)CAPS標(biāo)記與高可溶性固形物基因緊密連鎖,選擇效果顯著,均可用于分子標(biāo)記輔助選擇。TG161的標(biāo)記輔助選擇優(yōu)于TG237。 (4)從BC1群體的80個(gè)單株中篩選出了8個(gè)發(fā)生分子標(biāo)記單交換的單株,其中4個(gè)單株:260-68、260-64、260-16和260-57的可溶性固形物含量分別為:5。97、5。92、5。84、5。84,遠(yuǎn)高
6、于各個(gè)組合的平均水平??梢钥隙?,這4個(gè)單株含有的來(lái)自多毛番茄的外源片段比TA1218要短,不良基因連鎖累贅的影響進(jìn)一步消弱,更進(jìn)一步突出目的基因的作用。而且除了可溶性固形物含量較高外,4個(gè)單株均表現(xiàn)為粉紅色果色,生長(zhǎng)勢(shì)、果實(shí)大小、單果重、總生物量等綜合農(nóng)藝性狀較好,可作為優(yōu)異的番茄高可溶性固形物育種種質(zhì)。 (5)使用cDNA-AFLP技術(shù)對(duì)番茄果實(shí)不同發(fā)育階段的的基因差異性表達(dá)進(jìn)行分析,獲得了95個(gè)在嫩葉及果實(shí)的膨大期、綠熟期、
7、轉(zhuǎn)色期和完全成熟期特異表達(dá)的TDF。在NCBI中的nr庫(kù)里進(jìn)行BLAST分析發(fā)現(xiàn)9個(gè)TDF與已發(fā)表的基因、mRNA或cDNA克隆的序列有較高的相似性。其中一個(gè)TDF-23-262R-245來(lái)自262(LA1563×9706)的紅熟期,由引物組合E11/M48經(jīng)選擇性擴(kuò)增后獲得,長(zhǎng)度為245bp,該TDF與擬南芥(Arabidopsisthaliana)中編碼ATPbinding/ATP-dependenthelicase/helicas
8、e/nucleicacidbindingATlG63250mRNA的序列具有較高的相似性。表明該基因在紅熟期特異表達(dá)。有可能涉及果實(shí)從轉(zhuǎn)色到紅熟發(fā)育期中物質(zhì)的合成和積累的代謝調(diào)節(jié)作用,從而造成該品質(zhì)番茄果實(shí)的可溶性固形物表現(xiàn)獨(dú)有。TDF-15-269L-296序列與TomatorbcS3Ageneforribulose1,5-bisphosphatecarboxylae/oxygenasesmallsubunit基因具有較高的相似性,該
9、TDF的272個(gè)堿基序列與之具有98﹪的相似性(272/276)。該基因在光合產(chǎn)物轉(zhuǎn)化代謝中起調(diào)節(jié)作用,具有催化氧化戊糖,合成三磷酸腺苷的功能。 (6)14個(gè)TDF與己知功能的基因序列的同源性相比較低,在EST庫(kù)中找到相似性很高的己知EST。從中選取長(zhǎng)度合適,關(guān)鍵時(shí)期差異表達(dá)的TDF,利用網(wǎng)絡(luò)信息資源對(duì)其進(jìn)行電子克隆,氨基酸結(jié)構(gòu)以及功能預(yù)測(cè)分析等。最終獲得一條1167bp包含完整ORF的DNA鏈,其編碼一條長(zhǎng)度為163的肽鏈。對(duì)
10、這條氨基酸序列的預(yù)測(cè)分析可知其分子量為17。96KD,等電點(diǎn)為7。76,有5個(gè)磷酸化位點(diǎn)的跨膜蛋白,并推測(cè)出相應(yīng)的二級(jí)和三級(jí)結(jié)構(gòu),對(duì)其的功能預(yù)測(cè)分析結(jié)果表明該氨基酸序列的功能與乙醇脫氫酶相關(guān)。 (7)另外有3個(gè)TDF,無(wú)論在基因庫(kù)還是在EST庫(kù)中,都沒(méi)有搜索到較高相似性的已知基因或EST序列,表明其在已有的數(shù)據(jù)庫(kù)中沒(méi)有相似的序列,為首次獲得的cDNA片段,其所在的基因有可能是未有報(bào)道過(guò)的新基因。對(duì)其深入研究獲得該cDNA全長(zhǎng)以及
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