不同腸道益生菌株治療急性潰瘍性結(jié)腸炎小鼠模型的作用及其機(jī)制.pdf

1、目的：研究雙歧桿菌和乳酸桿菌在DSS誘導(dǎo)的急性潰瘍性結(jié)腸炎小鼠模型中的治療作用，研究不同益生菌對DSS誘導(dǎo)的急性潰瘍性結(jié)腸炎小鼠的作用機(jī)制及其對結(jié)腸粘膜的HSP70、GR、IL10的影響。 方法： (1)篩選有效灌腸治療潰瘍性結(jié)腸炎的功能益生菌將Balb/c小鼠隨機(jī)分為8組，分別為正常對照組、模型對照組、陰性對照組、陽性對照組、DSS+CMS-H004 灌腸組(DSS造模+1×10<'9>CFU/mlCMS-H004菌液

2、灌腸)、DSS+CH22 灌腸組(DSS造模+1×10<'9>CFU/mlCH22菌液灌腸)、DSS+CMS-H002 灌腸組(DSS造模+1×10<'9>CFU/mlCMS-H002 菌液灌腸)、DSS+f3-5 灌腸組(DSS造模+1×10<'9>CFU/mlf3-5 菌液灌腸)，其中CMS-H004 菌株和CH22菌株為腸道分離的雙歧桿菌，CMS-H002菌株和f3-5菌株為腸道分離的乳酸桿菌。實驗過程中每日觀察小鼠進(jìn)食、活動等一

3、般情況以及體重、糞便、及糞便隱血情況，評估結(jié)腸炎嚴(yán)重程度，9天后各組所得結(jié)腸標(biāo)本，觀察各組小鼠結(jié)腸的大體改變、測量整個結(jié)腸長度，行HE染色，觀察鏡下結(jié)腸病理變化。 (2)雙歧桿菌加重急性潰瘍性結(jié)腸炎結(jié)腸粘膜損傷的機(jī)制分析將Balb/c小鼠隨機(jī)分為8組，分別為正常對照組、模型對照組、陰性對照組、陌性對照組、DSS+雙歧桿菌CMS-H004：灌腸組(DSS造模+1×10<'9>CFU/mlCMS-H004 菌液灌腸)、DSS+雙歧桿

4、菌CH22灌腸組(DSS造模+1×10<'9>CFU/mlCH22 菌液灌腸)、單純雙歧桿菌CMS-H004灌腸組(1×10<'9>CFU/ml CMS-H004 菌液灌腸)、單純雙歧桿菌CH22灌腸組(1×10<'9>CFU/mlCH22 菌液灌腸)。實驗過程中每日觀察小鼠進(jìn)食、活動等一般情況以及體重、糞便、及糞便隱血情況，評估結(jié)腸炎嚴(yán)重程度，9 天后各組所得結(jié)腸標(biāo)本，觀察各組小鼠結(jié)腸的大體改變、測量整個結(jié)腸長度，行HE染色，觀察鏡下

5、結(jié)腸病理變化，并應(yīng)用免疫組化染色、RT-PCR 技術(shù)、Western-blotting 法檢測結(jié)腸粘膜中IL-10、GR和HSP70的表達(dá)。 (3)乳酸桿菌灌腸治療DSS誘導(dǎo)的急性潰瘍性結(jié)腸炎小鼠模型的作用及其機(jī)制將Balb/c小鼠隨機(jī)分為6組，分別為正常對照組、模型對照組、陰性對照組、陽性對照組、DSS+乳酸桿菌CMS-H002灌腸組(DSS造模+1×10<'9>CFU/mlCMS-H002 菌液灌腸)、DSS+乳酸桿菌f3-

6、5 灌腸組(DSS造模+1×10<'9>CFU/mlf3-5 菌液灌腸)。實驗過程中每日觀察小鼠進(jìn)食、活動等一般情況以及體重、糞便、及糞便隱血情況，評估結(jié)腸炎嚴(yán)重程度，9天后各組所得結(jié)腸標(biāo)本，觀察各組小鼠結(jié)腸的大體改變、測量整個結(jié)腸長度，行HE染色，觀察鏡下結(jié)腸病理變化，并應(yīng)用免疫組化染色、RT-PCR技術(shù)、Western-blotting法檢測結(jié)腸粘膜中IL-10、GR和HSP70的表達(dá)。 結(jié)果： (1)DSS造模過程

7、中給予雙歧桿菌(CMS-H004株及CH22株)灌腸加重小鼠的腹瀉、出血和體重減輕，也能加重腸道粘膜的損傷及炎性細(xì)胞浸潤，乳酸桿菌(CMS-H002株及f3-5株)灌腸可減輕小鼠的腹瀉、出血和消瘦，也能減輕腸道粘膜的損傷及炎性細(xì)胞浸潤。 (2)DSS造模過程中給予雙歧桿菌(CMS-H004株及CH22株)灌腸加重小鼠的腹瀉、出血和體重減輕，也能加重腸道粘膜的損傷及炎性細(xì)胞浸潤，結(jié)腸粘膜IL-10、HSP70表達(dá)減少，GR表達(dá)正常

8、；而單純給予雙歧桿菌灌腸小鼠，不出現(xiàn)結(jié)腸炎表現(xiàn)，與正常對照組小鼠比較體重、一般情況及腸粘膜病理檢查無明顯差異，結(jié)腸粘膜IL-10、HSP70、GR表達(dá)正常。 (3)乳酸桿菌(CMS-H002株及f3-5株)灌腸上調(diào)IL10、HSP70的表達(dá)。 結(jié)論： (1)雙歧桿菌的某些菌株在結(jié)腸粘膜屏障功能受損的情況下，可誘導(dǎo)結(jié)腸粘膜HSP70、IL10表達(dá)降低，加重了UC的結(jié)腸粘膜損傷。 (2)雙歧桿菌的某些菌株可能