菟絲子水提液對大鼠胚胎發(fā)育毒性的實驗研究.pdf

1、目的：探究菟絲子水提液對孕鼠及胚胎發(fā)育的影響。
　　 方法：
　　 1.急性毒性試驗：最大耐受劑量(MTD)法檢測菟絲子水提液對SD大鼠的急性致毒。
　　 2.大鼠致畸實驗與微核實驗：選SD孕鼠60只，分6組，每組10只。菟絲子水提液高、中、低劑量組(即40g/kg、20g/kg、10g/kg)及陰性對照組(NS，1ml/100g)，于孕第6～18天每日灌胃一次。陽性對照組(致畸實驗)，環(huán)磷酰胺(CP)12.5m

2、g/kg于孕第13天腹腔注射1次。陽性對照組(微核試驗)，CP40 mg/kg，分別于孕第17、18天每日腹腔注射1次。各組孕鼠均于孕18天麻醉、取材檢測：①孕鼠體重、子宮與卵巢重量指數(shù)、卵巢黃體數(shù)；胚胎植入情況、活胎率、胎吸收率、死胎率，胎盤重。②胚胎體重(濕重與干重)、身長與尾長；畸形胚胎及骨骼發(fā)育測量。③孕鼠骨髓嗜多染紅細胞微核率、胚胎肝嗜多染紅細胞微核率。
　　 3.大鼠胚胎肢芽培養(yǎng)試驗：選成年SD雄鼠12只，菟絲子水提

3、液分別按高、低(40g/kg、10g/kg)劑量、NS(1ml/100g)、CP(40mg/kg)4組劑量灌胃后制備含藥血清備用。另選孕第14.5天SD孕鼠無菌條件下取出胚胎，切取前肢芽分成4組(15個前肢芽/組/次試驗)，各組按培養(yǎng)體積的10％加含藥血清培養(yǎng)72小時，收獲各組肢芽進行處理、檢測：①取10只肢芽/組，體視鏡下測量長度、染色透明后行Neubert評分。②取5只肢芽/組，制備細胞懸液光鏡下檢測肢芽細胞凋亡率。
　　

4、結(jié)果：
　　 1.菟絲子水提液經(jīng)口對SD大鼠的最大給藥量為80g/kg。
　　 2.菟絲子水提液的大鼠致畸試驗與微核試驗：①菟絲子水提液各組對孕鼠的體重增長率、生殖器官重量指數(shù)、黃體數(shù)、胚胎植入與陰性對照組相比，無顯著性差異(P>0.05)。②菟絲子水提液中、低劑量組胚胎的身長、尾長、胚胎體重、胚胎干重、胎盤重、上枕骨骨化級別與陰性對照組比無顯著性差異(P>0.05)，而高劑量組與陰性對照組比有顯著差異(P<0.05)；

5、菟絲子水提液各劑量組對胚胎外觀形態(tài)、軀干骨、后肢骨和前肢腕骨、爪骨的發(fā)育與陰性對照組比，無顯著性差異(P>0.05)。而陽性對照組以上所有數(shù)據(jù)均比陰性對照組低，有顯著差異(P<0.05)。③微核實驗：菟絲子水提液(40g/kg·d)可致孕鼠骨髓細胞、胚胎肝細胞嗜多染紅細胞微核率升高，與陰性對照組對比，有顯著性差異(P<0.01)。菟絲子水提液(20g、10g/kg·d)對孕鼠骨髓細胞、胚胎肝細胞嗜多染紅細胞微核率與陰性對照組比，無顯著性

6、差異(P>0.05)。
　　 3.菟絲子水提液含藥血清對SD大鼠胚胎肢芽發(fā)育的影響：①菟絲子水提液低、高劑量含藥血清培養(yǎng)E14.5前肢芽72h，體視鏡(10倍)測量前肢芽長度、軟骨發(fā)育分化Neubert評分與陰性對照組比較，無顯著差異(P>0.05)。而陽性對照組(CP組)則比陰性對照組發(fā)育差，兩者相比具有顯著性差異(P<0.01)。②菟絲子水提液高、低劑量含藥血清組肢芽細胞凋亡率與陰性對照組相比，無顯著差異性(P>0.05)。

7、
　　 結(jié)論：
　　 1.菟絲子水提液對SD大鼠經(jīng)口最大給藥量大于80 g/kg，屬無毒級。
　　 2.菟絲子水提液劑量達40g/kg時，對孕鼠體重、植入、生殖器官重量無毒性。
　　 3.菟絲子水提液灌胃SD孕鼠劑量達(40g/kg)時，對胚胎發(fā)育有輕微影響，但未致畸；而在20g/kg以下劑量時對胚胎的發(fā)育無毒性影響。
　　 4.菟絲子水提液灌胃劑量在40g/kg時可誘發(fā)孕鼠及胚胎微核率增加，有潛