去抗原牛松質骨復合骨髓間充質干細胞重建大鼠眶骨缺損的實驗研究.pdf

1、分類號：密級：學位類別：R7775科學學位口專業(yè)學位團學校代碼：學號：學科門類：1O06220091115醫(yī)學又灃_眚科^垮博士學位論文DOCToRALDISSERTATION論文題目：去抗原牛松質骨復合骨髓間充質干細胞重建大鼠眶骨缺損的實驗研究TITLE：Reconstructionoforbitaldefectsbyimplantationofantigen—freebovinecancellousbonescaffold—comb

2、inedwithbonemarrowmesenchymalstemcellsinrats一級學科：臨床醫(yī)學二級學科：眼科學論文作者：趙晶晶指導教師：李筱榮導師組成員：楊春波于美麗天津醫(yī)科大學研究生院二O一三年五月天津醫(yī)科大學博士學位論文中文摘要第一部分去抗原牛松質骨的制備方法與結構分析目的：探討去抗原牛松質骨材料的制備方法并分析所制備材料的結構特點。方法：選取新鮮小牛肱骨近端松質骨鋸為8mmx5mmx5mm規(guī)格顆粒后溫水沖洗。分別以05

3、％TritonX100與10％氯化鈉脫細胞、甲醇與氯仿脫脂、30％過氧化氫脫蛋白以及04M氯化氫部分脫鈣處理。雙蒸水沖洗后烘干顆粒。鈷60輻照后800C低溫保存。對制備的去抗原松質骨支架進行大體結構和掃描電鏡微觀結構觀察分析以及孔徑大小與孔隙率測定。結果：去抗原牛松質骨材料為乳白色疏松多孔結構，孔洞間相互連通成立體網狀結構。掃描電鏡觀察可見彼此相連相互溝通且孔隙大小較為規(guī)則的多孔狀固態(tài)結構。松質骨材料的孔徑平均值為(3742士692)g

4、m，孔隙率平均值為(581士114)％。結論：去抗原牛松質骨材料呈現(xiàn)彼此連通的多孔網狀三維立體結構，具有與骨組織工程要求相適應的孔徑與孔隙率，具備作為骨組織工程適宜的支架材料應有的基本結構特征。第二部分去抗原牛松質骨載體的生物相容性研究目的：觀察與評價經過脫細胞、脫脂、脫蛋白與部分脫鈣處理的去抗原牛松質骨支架材料的生物相容性。方法：使用去抗原牛松質骨材料進行以下五個體內實驗。一、急性毒性實驗：將去抗原牛松質骨材料浸提液與生理鹽水分別注入

5、小鼠腹腔，觀察記錄是否有不良反應或死亡發(fā)生。二、熱源實驗：將去抗原牛松質骨浸提液與生理鹽水分別注入家兔耳緣靜脈后連續(xù)測體溫3次。三、溶血實驗：將兔血混懸液分別加入去抗原牛松質骨、碳酸鈉(陽性對照)、生理鹽水(陰性對照)中。觀察有無溶血現(xiàn)象并計算溶血率。四、皮內刺激實驗：將去抗原牛松質骨、20％乙醇生理鹽水分別注射于新西蘭白兔皮下，注射后即刻、6h、24h、48h、72h觀察記錄注射后狀況并評分計算局部原發(fā)刺激指數(shù)和平均原發(fā)刺激指數(shù)。五、