去抗原牛松質(zhì)骨復(fù)合骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞重建大鼠眶骨缺損的實驗研究.pdf

1、分類號：密級：學(xué)位類別：R7775科學(xué)學(xué)位口專業(yè)學(xué)位團(tuán)學(xué)校代碼：學(xué)號：學(xué)科門類：1O06220091115醫(yī)學(xué)又灃_眚科^垮博士學(xué)位論文DOCToRALDISSERTATION論文題目：去抗原牛松質(zhì)骨復(fù)合骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞重建大鼠眶骨缺損的實驗研究TITLE：Reconstructionoforbitaldefectsbyimplantationofantigen—freebovinecancellousbonescaffold—comb

2、inedwithbonemarrowmesenchymalstemcellsinrats一級學(xué)科：臨床醫(yī)學(xué)二級學(xué)科：眼科學(xué)論文作者：趙晶晶指導(dǎo)教師：李筱榮導(dǎo)師組成員：楊春波于美麗天津醫(yī)科大學(xué)研究生院二O一三年五月天津醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文中文摘要第一部分去抗原牛松質(zhì)骨的制備方法與結(jié)構(gòu)分析目的：探討去抗原牛松質(zhì)骨材料的制備方法并分析所制備材料的結(jié)構(gòu)特點。方法：選取新鮮小牛肱骨近端松質(zhì)骨鋸為8mmx5mmx5mm規(guī)格顆粒后溫水沖洗。分別以05

3、％TritonX100與10％氯化鈉脫細(xì)胞、甲醇與氯仿脫脂、30％過氧化氫脫蛋白以及04M氯化氫部分脫鈣處理。雙蒸水沖洗后烘干顆粒。鈷60輻照后800C低溫保存。對制備的去抗原松質(zhì)骨支架進(jìn)行大體結(jié)構(gòu)和掃描電鏡微觀結(jié)構(gòu)觀察分析以及孔徑大小與孔隙率測定。結(jié)果：去抗原牛松質(zhì)骨材料為乳白色疏松多孔結(jié)構(gòu)，孔洞間相互連通成立體網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)。掃描電鏡觀察可見彼此相連相互溝通且孔隙大小較為規(guī)則的多孔狀固態(tài)結(jié)構(gòu)。松質(zhì)骨材料的孔徑平均值為(3742士692)g

4、m，孔隙率平均值為(581士114)％。結(jié)論：去抗原牛松質(zhì)骨材料呈現(xiàn)彼此連通的多孔網(wǎng)狀三維立體結(jié)構(gòu)，具有與骨組織工程要求相適應(yīng)的孔徑與孔隙率，具備作為骨組織工程適宜的支架材料應(yīng)有的基本結(jié)構(gòu)特征。第二部分去抗原牛松質(zhì)骨載體的生物相容性研究目的：觀察與評價經(jīng)過脫細(xì)胞、脫脂、脫蛋白與部分脫鈣處理的去抗原牛松質(zhì)骨支架材料的生物相容性。方法：使用去抗原牛松質(zhì)骨材料進(jìn)行以下五個體內(nèi)實驗。一、急性毒性實驗：將去抗原牛松質(zhì)骨材料浸提液與生理鹽水分別注入

5、小鼠腹腔，觀察記錄是否有不良反應(yīng)或死亡發(fā)生。二、熱源實驗：將去抗原牛松質(zhì)骨浸提液與生理鹽水分別注入家兔耳緣靜脈后連續(xù)測體溫3次。三、溶血實驗：將兔血混懸液分別加入去抗原牛松質(zhì)骨、碳酸鈉(陽性對照)、生理鹽水(陰性對照)中。觀察有無溶血現(xiàn)象并計算溶血率。四、皮內(nèi)刺激實驗：將去抗原牛松質(zhì)骨、20％乙醇生理鹽水分別注射于新西蘭白兔皮下，注射后即刻、6h、24h、48h、72h觀察記錄注射后狀況并評分計算局部原發(fā)刺激指數(shù)和平均原發(fā)刺激指數(shù)。五、