大麻素WIN55,212-2對(duì)BEL-7402肝癌細(xì)胞增殖、遷移的影響及分子機(jī)制研究.pdf

1、近年來(lái)，大量研究表明，大麻素具有抗腫瘤作用，人工合成大麻素WIN55,212-2(WIN)可以降低BEL7402肝癌細(xì)胞的活力、抑制增殖以及誘導(dǎo)其凋亡，過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體γ(PPARγ)發(fā)揮了巨大作用，大麻素 WIN能停滯前列腺癌 LNCap細(xì)胞的細(xì)胞周期，大麻素能夠抑制肺非小細(xì)胞瘤的生長(zhǎng)、遷移，但是目前還沒(méi)有相關(guān)報(bào)道指出 WIN是否會(huì)對(duì)BEL7402細(xì)胞的細(xì)胞周期和遷移的影響及其可能機(jī)制，而且WIN抗腫瘤的機(jī)制還沒(méi)有被完全闡明

2、。
　　目的：探討大麻素WIN對(duì)BEL-7402細(xì)胞的細(xì)胞周期、增殖和遷移的影響，對(duì)其機(jī)制進(jìn)行初步研究，為尋找治療肝癌的靶向藥物提供依據(jù)。
　　方法：使用CCK-8試劑盒檢測(cè)不同濃度大麻素WIN對(duì)BEL-7402細(xì)胞活力的影響，碘化丙啶(PI)單染色法檢測(cè)大麻素WIN對(duì)BEL-7402細(xì)胞的細(xì)胞周期分布的影響，western blot法檢測(cè)大麻素WIN對(duì)周期相關(guān)蛋白表達(dá)的影響。分別用劃痕遷移法和transwell小室法檢測(cè)不

3、同濃度大麻素WIN對(duì)BEL7402細(xì)胞在水平和垂直面上的遷移能力變化，western blot法檢測(cè)不同濃度大麻素WIN對(duì)BEL7402細(xì)胞遷移相關(guān)蛋白表達(dá)的影響。使用CCK-8試劑盒檢測(cè)不同濃度CB2受體選擇性拮抗劑AM630對(duì)BEL-7402細(xì)胞活力的影響，分別用PI單染色法和western blot法檢測(cè)CB2受體選擇性拮抗劑AM630對(duì)BEL7402細(xì)胞的細(xì)胞周期及ERK1/2表達(dá)的影響。使用CCK-8試劑盒檢測(cè)不同濃度CB2受

4、體選擇性激活劑JWH-015對(duì)BEL-7402細(xì)胞活力的影響，用western blot法檢測(cè)CB2受體選擇性激活劑JWH-015對(duì)BEL7402細(xì)胞的ERK1/2表達(dá)的影響。使用CCK-8試劑盒檢測(cè)不同濃度 ERK1/2選擇性抑制劑PD98059對(duì)BEL-7402細(xì)胞活力的影響，分別用PI單染色法和western blot法檢測(cè)ERK1/2選擇性抑制劑PD98059對(duì)BEL7402細(xì)胞的細(xì)胞周期及細(xì)胞周期相關(guān)蛋白的影響。
　　結(jié)

5、果：WIN處理后，BEL-7402細(xì)胞的活力降低，細(xì)胞周期停滯在G1期，細(xì)胞增殖受到抑制，BEL7402細(xì)胞的水平遷移能力及垂直遷移能力均受到抑制，且具有劑量依賴性。Western blot結(jié)果顯示，WIN處理后，BEL-7402細(xì)胞中，全長(zhǎng)基質(zhì)金屬蛋白酶9（MMP9）、切割MMP9蛋白質(zhì)、ERK1/2蛋白質(zhì)磷酸化水平、Rb蛋白質(zhì)磷酸化水平、cyclin D1蛋白質(zhì)、CDK4蛋白質(zhì)及轉(zhuǎn)錄因子E2F1的表達(dá)水平均下調(diào)，p27蛋白質(zhì)的表達(dá)水

6、平上調(diào)，且具有劑量依賴性。CB2受體選擇性拮抗劑AM630處理后，BEL-7402細(xì)胞的活力下降，且具有劑量依賴性。CB2受體選擇性拮抗劑AM630減弱了WIN引起的細(xì)胞周期停滯效應(yīng)，同時(shí)減弱了WIN對(duì)ERK1/2磷酸化水平的下調(diào)作用。CB2受體選擇性激動(dòng)劑JWH-015處理BEL7402細(xì)胞，細(xì)胞的活力下降，且具有劑量依賴性。JWH-015同WIN一樣可以下調(diào)BEL7402中ERK1/2的磷酸化水平。ERK1/2選擇性抑制劑 PD98

7、059處理后，BEL7402細(xì)胞的活性下降，具有劑量依賴性。PD98059同WIN一樣可以將BEL7402細(xì)胞停滯在G1期，并上調(diào)p27蛋白質(zhì)表達(dá)水平、下調(diào)cyclin D1蛋白質(zhì)表達(dá)水平。
　　結(jié)論：大麻素WIN能夠停滯BEL-7402細(xì)胞的細(xì)胞周期、抑制細(xì)胞增殖及遷移，ERK1/2在這些效應(yīng)中發(fā)揮重要的信號(hào)傳導(dǎo)作用。CB2受體在WIN引起的ERK1/2磷酸化水平下調(diào)、細(xì)胞周期停滯、細(xì)胞增殖抑制以及細(xì)胞遷移抑制中起了重要作用。E