蜂毒素誘導(dǎo)人肝癌細胞株Bel-7402惡性表型轉(zhuǎn)化的實驗研究.pdf

1、目的:觀察蜂毒素處理肝癌細胞后對人肝癌細胞株Bel-7402惡性表型的影響.方法:根據(jù)濃度分別為1、2、4、8、16μg/m1的蜂毒素對不同肝癌細胞株抑制作用預(yù)實驗的結(jié)果,設(shè)立終濃度為2μg/ml和4μg/ml兩個實驗組,以全反式維甲酸(ATRA,All-trans retinoic acid)作陽性對照,陰性對照組加入等體積RPMI-1640培養(yǎng)基.觀察蜂毒素作用于人肝癌Bel-7402細胞株后(1)MTT方法測定對腫瘤細胞增殖的影響

2、.(2)光學(xué)顯微鏡和透射電鏡下觀察對形態(tài)及生物學(xué)行為的影響,ConA凝集試驗及克隆形成能力反映處理后細胞粘附能力及生長潛能.(3)ELISA法測定甲胎蛋白含量、重氮反應(yīng)比色法測定γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶活力、比色法測定堿性磷酸酶活力、溴甲酚綠法測定白蛋白含量,檢測對肝癌細胞代謝與分泌的影響.(4)免疫組織化學(xué)法檢測處理前后c-myc基因表達的差別.結(jié)果:研究表明(1)2μg/ml和4μg/ml蜂毒素均能抑制人肝癌Bel-7402細胞株的增殖,非

3、細胞毒效應(yīng)介導(dǎo),且在一定的范圍內(nèi),時效關(guān)系、量效關(guān)系明顯(2)蜂毒素處理后的Bel-7402細胞增殖速度變緩,克隆形成能力大大降低,軟瓊脂集落形成能力也明顯下降.透射電鏡下超微結(jié)構(gòu)趨向成熟.(3)AFP含量、γ-GT活力均有不同程度的下降;各處理組ALP活力,Alb含量均顯著高于對照(4)免疫組織化學(xué)檢測表明c-myc基因表達顯著降低.結(jié)論:(1)低劑量蜂毒素能有效誘導(dǎo)人肝癌Bel-7402細胞株惡性表型的轉(zhuǎn)化;(2)在濃度2-4μg/