功能性細(xì)胞模型的建立及其在中草藥研究中的應(yīng)用.pdf

1、本文利用功能性細(xì)胞模型對中草藥及其分離組分進(jìn)行篩選分析，并用免疫熒光，蛋白印跡等生化實驗技術(shù)進(jìn)一步驗證其作用機(jī)制，這種建立在TCRP(Time/dose-dependent cell response pattern)技術(shù)上的功能性細(xì)胞模型不僅為中草藥的活性篩選和功能預(yù)測提供了一個很好的研究手段，也對中草藥的開發(fā)應(yīng)用具有一定的指導(dǎo)意義。鑒于中草藥物種豐富、成分復(fù)雜的特點，為了更好地研究中草藥，建立多種反映不同細(xì)胞功能的細(xì)胞模型也具有很大

2、的價值，因此本文還基于該技術(shù)建立了腸道上皮屏障的細(xì)胞模型。主要內(nèi)容如下：
　　 1.TCRP技術(shù)的原理及其用于細(xì)胞學(xué)研究的概況
　　 基于微電子阻抗的實時細(xì)胞功能分析儀可以監(jiān)測到特定的細(xì)胞對外界刺激時間劑量依賴的反應(yīng)，這項技術(shù)被稱之為TCRP技術(shù)，本章主要對該技術(shù)的原理以及其在細(xì)胞功能學(xué)上的研究進(jìn)展做一綜述。
　　 2.基于EGF/EGFR(Epidermal growth factor/Epidermalgro

3、wth factor receptor)模型的懷山藥抗腫瘤活性研究
　　 本文利用EGF/EGFR模型對大批量的中草藥進(jìn)行篩選分析得到山藥是具有抑制EGF信號功效的中藥材之一。在山藥分離的不同組分中，低極性組分具有明顯的抑制EGF信號的作用，并用蛋白印跡實驗檢測到該組分降低了EGF信號通路中一個重要蛋白的磷酸化水平。另外還用順鉑誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的模型篩選了山藥的不同分離組分，發(fā)現(xiàn)可以有效降低順鉑IC50的有效部位也該極性段，由此我們

4、推測山藥提取物的低極性組分可能具有抗腫瘤活性。
　　 3.基于TCRP技術(shù)的腸道上皮屏障模型的建立
　　 利用微電子傳感器細(xì)胞實時分析儀動態(tài)監(jiān)測腸上皮Caco-2細(xì)胞對乙醇刺激的反應(yīng)所得到的阻抗值的變化趨勢與傳統(tǒng)評價上皮屏障功能的跨上皮電阻法所得到TER圖譜非常吻合，免疫熒光圖像顯示細(xì)胞骨架蛋白F-actin與緊密連接蛋白ZO-1在乙醇的刺激下同步發(fā)生定位的改變。另外，表皮生長因子EGF，一氧化氮合成酶(iNOS)抑制劑