睡眠剝奪快速抗抑郁機制中腺苷及其受體對CREB的影響.pdf

1、背景和目的：睡眠剝奪能夠發(fā)揮快速抗抑郁效應，但其神經(jīng)生物學機制至今尚不明確。
　　 睡眠剝奪過程中可觀察到胞外腺苷水平明顯升高及其受體發(fā)生一系列的變化，這提示腺苷系統(tǒng)在抑郁癥病理生理、睡眠剝奪快速抗抑郁效應的機制、療效等方面有一定作用。另一方面，CREB(環(huán)磷酸腺苷反應元件結(jié)合蛋白 )是抑郁癥相關信號通路中的一個交匯點。因此，本研究通過對慢性應激抑郁模型大鼠進行72 小時快眼動睡眠剝奪并結(jié)合應用腺苷受體拮抗劑，觀察海馬和前皮質(zhì)腦

2、區(qū)CREB 表達及磷酸化水平的變化，探討腺苷在睡眠剝奪快速抗抑郁機制中可能的作用方式。
　　 材料和方法：實驗動物為成年雄性Sprague Dawley 大鼠，隨機分為正常對照組（n=９，以下稱A 組）、應激造模組（n=54）。應激造模組采用21天慢性輕度不可預見性應激（chronic mild unpredicted stress，CMUS）和分養(yǎng)兩種經(jīng)典模型結(jié)合的方式來建立抑郁模型，采用隨機區(qū)組法把造模成功大鼠分為6 組：抑

3、郁模型組(B 組)、睡眠剝奪組(C組)、水環(huán)境對照組(D 組)、生理鹽水對照組(E 組)、腺苷A1 受體拮抗劑組(F 組)和腺苷A2a 受體拮抗劑組(G 組)、。利用小平臺水環(huán)境法對抑郁模型大鼠進行快眼動睡眠剝奪，并用大平臺水環(huán)境做對照，排除水環(huán)境的影響。采用自發(fā)活動測試和蔗糖水消耗實驗觀察大鼠抑郁行為的變化，Western-blot 方法檢測各組大鼠海馬、前皮質(zhì)CREB總蛋白及磷酸化水平的變化。
　　 結(jié)果：
　　 1

4、. 開場實驗：大鼠經(jīng)過21天CMUS后自發(fā)活動較正常對照組顯著減少（P<0.01）；C 組大鼠經(jīng)過72hREMSD后，自發(fā)活動與水環(huán)境對照組相比顯著增加（P<0.01）；F 組大鼠經(jīng)過72hREMSD后，自發(fā)活動無明顯變化（P>0.05），與E 組相比有顯著差異（P<0.01）；G 組大鼠經(jīng)過72hREMSD后，自發(fā)活動明顯增加（P<0.01），而且與E組相比無統(tǒng)計學差異（P>0.05）。
　　 2. 蔗糖水消耗試驗：大鼠經(jīng)過2

5、1天CMUS 處理后蔗糖水消耗量和蔗糖水消耗百分比均比正常對照組顯著減少（P<0.01）。
　　 3. CREB總蛋白(tCREB)及磷酸化水平(pCREB和pCREB/tCREB)的變化：
　　 1)各處理方式對抑郁模型大鼠前皮質(zhì)tCREB沒有影響（P>0.05）。經(jīng)過21天CMUS，大鼠前皮質(zhì)磷酸化水平較正常對照組顯著減少(P<0.01）；72hREMSD使C、E組大鼠前皮質(zhì)pCREB水平升高（P<0.01）；F、G

6、組大鼠前皮質(zhì)pCREB水平明顯低于與E組（P<0.01）。
　　 2)各處理方式對抑郁模型大鼠海馬tCREB沒有影響（P>0.05）。經(jīng)過21天CMUS，大鼠海馬pCREB與正常對照組相比顯著減少（P<0.01）；72hREMSD使C、E組大鼠海馬pCREB水平顯著提高（P<0.05）；F組大鼠前皮質(zhì)pCREB水平顯著低于生理鹽水對照組（P<0.05）；而G組在72hREMSD后大鼠海馬pCREB明顯高于B組（P<0.05），與

7、E組相比差異沒有統(tǒng)計學意義。
　　 結(jié)論：
　　 1. 21天CMUS 可導致大鼠自發(fā)活動明顯減少，72 h REMSD 可快速逆轉(zhuǎn)這種改變；在72 hREMSD 過程中對大鼠注射腺苷A1 受體拮抗劑可阻斷REMSD 在行為學上的效應，而在72 hREMSD 過程中注射腺苷A2A 受體拮抗劑，大鼠的自發(fā)活動仍可增加；
　　 2. 21天CMUS 降低大鼠海馬和前皮質(zhì)pCREB 水平，可能是慢性應激導致大鼠抑郁樣行