角膜緣基質(zhì)誘導(dǎo)毛囊干細(xì)胞角膜上皮樣轉(zhuǎn)分化的研究.pdf

1、角膜緣基質(zhì)誘導(dǎo)毛囊干細(xì)胞角膜上皮樣轉(zhuǎn)分化的研究重慶大學(xué)碩士學(xué)位論文學(xué)生姓名：姜自玲指導(dǎo)教師：楊力教授楊恬教授專業(yè)：細(xì)胞生物學(xué)學(xué)科門類：生物學(xué)重慶大學(xué)生物工程學(xué)院二OO八年四月重慶大學(xué)碩士學(xué)位論文中文摘要I摘要毛囊干細(xì)胞(hairfolliclestemcells)是位于毛囊bulge區(qū)的一群具有慢周期性、高度增殖潛能和自我更新能力的未分化或低分化細(xì)胞。該細(xì)胞體外克隆形成能力強(qiáng)，損傷或某些生長(zhǎng)因素刺激后可產(chǎn)生短暫增殖細(xì)胞（TA細(xì)胞）以維持

2、組織的自我更新和修復(fù)。Oshima等[1]用遺傳工程學(xué)的方法進(jìn)行了表達(dá)半乳糖苷酶的小鼠的毛囊研究，證實(shí)毛囊干細(xì)胞的bulge定位，同時(shí)也提出毛囊bulge部位的干細(xì)胞不僅在毛囊周期性生長(zhǎng)中起重要作用，同時(shí)也是表皮自我更新的細(xì)胞來源。由毛囊干細(xì)胞分裂產(chǎn)生的短暫增殖細(xì)胞亦可上行至皮脂腺，在維持皮脂腺方面發(fā)揮作用[2]，[3]。近年來，對(duì)毛囊及其周期[4]的研究發(fā)展十分迅速，對(duì)毛囊的了解及其干細(xì)胞的定位也更加清楚。而致力于毛囊干細(xì)胞的體外鑒定

3、純化以期最終建系的研究也開始了探索[5]。角膜的損傷修復(fù)由于存在角膜來源有限以及異體排斥等問題，因此部分實(shí)驗(yàn)室轉(zhuǎn)向經(jīng)由細(xì)胞轉(zhuǎn)分化途徑以期獲得新的角膜來源，目前，國(guó)內(nèi)外角膜修復(fù)相關(guān)的轉(zhuǎn)分化研究均取得了不同程度的進(jìn)展［6］，［7］，[8]。本實(shí)驗(yàn)基于本室以往的研究，于體外用角膜緣組織勻漿液對(duì)毛囊bulge細(xì)胞進(jìn)行誘導(dǎo)培養(yǎng)，探討毛囊干細(xì)胞體外誘導(dǎo)轉(zhuǎn)分化為角膜上皮樣細(xì)胞的可行性。主要研究方法和結(jié)果如下：①毛囊干細(xì)胞的組織學(xué)定位采用免疫組織化學(xué)技

4、術(shù)，用CD34、α6integrin等毛囊干細(xì)胞干細(xì)胞標(biāo)記物陽性染色對(duì)毛囊干細(xì)胞進(jìn)行組織學(xué)定位。CD34以及α6integrin在毛囊隆突區(qū)以及其他毛囊外根鞘區(qū)皆陽性表達(dá)，這表明毛囊干細(xì)胞主要存在于毛囊隆突區(qū)。②毛囊干細(xì)胞的培養(yǎng)和鑒定無菌條件下取SD大鼠觸須部皮膚，DHanks液（含雙抗：青、鏈霉素）清洗。分離并培養(yǎng)毛囊bulge組織塊。待有細(xì)胞爬出生長(zhǎng)時(shí)即行換液，以后每隔1～2天換液以保證細(xì)胞良好生長(zhǎng)。當(dāng)生長(zhǎng)的細(xì)胞達(dá)80%融合時(shí)，即行