2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、第一部分:
   來曲唑誘導(dǎo)大鼠PCOS 動物模型的構(gòu)建及基因芯片的制備篩選
   目的:1.采用來曲唑灌胃方法構(gòu)建雌性Wistar 大鼠PCOS 動物模型,并分析比較模型組與對照組的血清睪酮(T),雌二醇(E2)和黃體生成素(LH)水平變化,胰島素抵抗相關(guān)的特征及卵巢的形態(tài)學(xué)改變。
   2.利用基因芯片的技術(shù)篩選兩組之間差異表達(dá)的microRNAs,探討其參與PCOS 發(fā)生和發(fā)展過程中的可能機(jī)制。
  

2、 方法:1、選取6周齡清潔級的雌性Wistar 大鼠,隨機(jī)分組為模型組和對照組,每組各20只。PCOS模型組:每日來曲唑1 mg/(kg·d)溶于1%的羧甲基纖維素(CMC)中,連續(xù)灌服21 d;對照組:不予處理,正常喂養(yǎng)。從用藥的第10天開始每日進(jìn)行陰道涂片至用藥期結(jié)束,在最后一次應(yīng)用來曲唑24h(并禁食12h)后,同時在處理對照組大鼠時,盡量控制其在動情間期。水合氯醛麻醉后切取卵巢,心臟取血,分離血清。全自動化學(xué)發(fā)光檢測儀測定血清

3、T,E2和LH;放射免疫學(xué)方法測定空腹血清胰島素(FINS),血糖儀測定空腹血糖(FBG),并計算胰島素抵抗指數(shù)(HOMA1-IR);稱重卵巢并測定大鼠體重;卵巢組織切片,HE 染色,并觀察其病理變化。
   2.從造模成功的PCOS模型組及正常對照組中各隨機(jī)選取3只大鼠,10%的水合氯醛腹腔麻醉后,心臟取血后迅速取出雙側(cè)卵巢,稱重后將其中的一個卵巢液氮冷凍固定保存,送往北京博奧生物有限公司應(yīng)用最新版本15.0的LC-scien

4、ce microRNAs表達(dá)譜微陣列芯片進(jìn)行篩選microRNAs。
   結(jié)果:
   1.陰道涂片結(jié)果顯示模型組無明顯的動情周期的改變,大多處于動情間期,而對照組則有明顯的動情周期的變化。模型組卵巢切片HE 染色顯示:卵巢有較多的囊狀擴(kuò)張卵泡,而黃體及發(fā)育階段卵泡數(shù)目明顯減少,卵泡內(nèi)卵母細(xì)胞和放射冠消失,顆粒細(xì)胞層數(shù)減少或消失,卵泡膜細(xì)胞及間質(zhì)細(xì)胞增生。對照組可見多個黃體及不同發(fā)育階段的卵泡,卵泡內(nèi)顆粒細(xì)胞呈多層,多

5、為8-9 層。
   2.與對照組比較,PCOS模型組血清T 顯著高于對照組(P<0.01),而血清FBG,F(xiàn)INS和HOMA1-IR 無統(tǒng)計學(xué)差異(均為P>0.05),兩組大鼠體重變化無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05),去除體重影響后PCOS模型組大鼠卵巢重量顯著大于對照組(P<0.05)。
   3.基因芯片結(jié)果表明,對照組與模型組兩組的卵巢之間大量有差異表達(dá)的microRNAs。與對照組比較,在模型組表達(dá)明顯增多有57個

6、microRNAs(P<0.01)其中有23個信號值較高差異較明顯,34個是信號值低于500 但是也有差異的;表達(dá)明顯減少的有43個microRNAs(P<0.01),其中20個信號值較高差異顯著,23個是信號值低于500 差異也顯著的,包括差異較大、且有證實(shí)意義的、與細(xì)胞增殖凋亡相關(guān)的mir-16,mir-21,mir-24,mir-31,mir-98,mir-125b,mir-143,mir-145,mir-150等。
  

7、 結(jié)論:
   1.來曲唑誘導(dǎo)雌性Wistar 大鼠PCOS 動物模型的卵巢病理改變及血內(nèi)分泌改變與PCOS 病人相似。陰道圖片也顯示出模型組無明顯的排卵周期的變化,這些改變類似于PCOS 患者的病理生理變化,但是此種模型無胰島素抵抗相關(guān)的改變征象??梢宰鳛檠芯糠且葝u素抵抗型PCOS的動物模型。
   2.模型組與正常組之間存在大量表達(dá)差異的microRNAs,說明microRNAs可能在PCOS 疾病的發(fā)生發(fā)展中有著重

8、要的作用,可以為研究PCOS 疾病的病理機(jī)制提供新的方向和線索,及進(jìn)一步驗(yàn)證相關(guān)microRNAs 有重要的參考價值。
   第二部分:大鼠PCOS動物模型中mir-21和mir-320 含量表達(dá)的驗(yàn)證
   目的:結(jié)合文獻(xiàn)報道與基因芯片篩選結(jié)果,選擇mir-21和mir-320進(jìn)行驗(yàn)證,觀察它們在PCOS模型組與正常組之間的表達(dá)差異,并探討其在PCOS疾病的發(fā)生發(fā)展中的可能機(jī)制。
   方法:采用實(shí)時熒光定量P

9、CR檢測兩組大鼠卵巢中mir-21和mir-320的表達(dá)水平,選擇snRNA U6 為內(nèi)參照miRNA,每份標(biāo)本均設(shè)2個平行復(fù)孔和1個陰性對照。
   結(jié)果:熒光定量PCR結(jié)果分析顯示模型組的mir-21的表達(dá)量相對對照組的表達(dá)量約是0.48,而mir-320在兩組之間的含量相當(dāng),無明顯的差別。
   結(jié)論:從real-timePCR驗(yàn)證的結(jié)果我們得知,mir-21和mir-320在兩組中的含量變化與基因芯片結(jié)果相符合。

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