對蝦白斑綜合癥病毒感染相關(guān)分子的篩選.pdf

1、對蝦為水產(chǎn)養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)中的重要經(jīng)濟品種，每年為人們帶來大量的海鮮食材并創(chuàng)造了巨大的經(jīng)濟效益。但近年來不斷的病害尤其是對蝦白斑綜合癥病毒(Whitespot syndrome virus，WSSV)導(dǎo)致對蝦大量減產(chǎn)，造成的直接或間接的經(jīng)濟損失十分巨大。研究對蝦先天性免疫機制對于對蝦抗病害十分重要。
　　本實驗室收集了365種對細胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)分子具有調(diào)節(jié)功能的化合物，在高等哺乳類如人和小鼠細胞中已經(jīng)通過使用這些化合物對其靶基因激活/抑制即控

2、制信號通路的開關(guān)來研究信號通路的功能。本實驗室在此方法基礎(chǔ)上，分離螯蝦造血組織并使用膠原酶制備單細胞懸液，將這些化合物處理細胞并人工感染W(wǎng)SSV病毒粒子，提取螯蝦造血干細胞總RNA并反轉(zhuǎn)錄得到cDNA進行Real-TimePCR，以螯蝦40S核糖體小亞基片段作為內(nèi)參基因，通過分析WSSV極早期基因ie1的轉(zhuǎn)錄水平來判斷化合物處理后能夠促進WSSV基因轉(zhuǎn)錄還是抑制其轉(zhuǎn)錄，最終實現(xiàn)篩選出具有抗病原微生物功能的信號通路。
　　經(jīng)過兩輪篩

3、選實驗，我們從365種對細胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)分子具有調(diào)節(jié)功能的化合物中篩選出55種能夠影響WSSV基因轉(zhuǎn)錄的化合物，其中17種能夠促進病毒基因ie1轉(zhuǎn)錄，38種能夠抑制其轉(zhuǎn)錄。隨后，通過細胞毒性實驗對55種化合物對細胞的毒性作用進行分析，以期排除因化合物本身對細胞的毒性作用而產(chǎn)生的影響。
　　本研究初步篩選出部分能夠影響WSSV基因ie1轉(zhuǎn)錄的化合物，并對其在靶信號通路中的作用機制嘗試闡明。該論文為抗病原微生物信號通路的研究以及對蝦免疫的