雞新城疫（Lasota株）、雞傳染性法氏囊病（NF-,8-株）二聯(lián)活疫苗的研制.pdf

1、按照《中華人民共和國獸用生物制品規(guī)程(2000年版)》(以下簡稱規(guī)程)中的《雞新城疫低毒力活疫苗制造及檢驗規(guī)程》及OIE的標準方法對從中國獸藥監(jiān)察所購買的新城疫病毒(NDV)Lasota株凍干種毒進行種毒鑒定，包括病毒的SPF雞胚復(fù)壯及傳代，病毒的平均死亡時間(MDT)和腦內(nèi)致病指數(shù)(ICPI)，對雞胚的毒力測定，病毒含量的測定，安全性，純凈性檢驗，特異性檢驗以及免疫原性的測定，結(jié)果表明所采用的Lasota毒株是穩(wěn)定的，符合ND低毒力活

2、疫苗株的要求。 按照規(guī)程中的《雞傳染性法氏囊病中等毒力活疫苗制造及檢驗規(guī)程》及OIE的標準方法對來自揚州大學農(nóng)業(yè)部畜禽傳染病學重點開放實驗室的傳染性法氏病毒(IBDV)NF8株進行種毒鑒定，包括毒種的病毒含量的測定、對雞胚及雛雞的毒力測定、對雛雞的安全性試驗、毒力穩(wěn)定性試驗、抗體產(chǎn)生期試驗、免疫原性的測定、免疫抑制安全性試驗、特異性檢驗以及純凈性檢驗。結(jié)果表明所采用的IBDV.NF8株毒力穩(wěn)定、無免疫抑制作用、能突破母源抗體干擾

3、、免疫原性好，是合適的生產(chǎn)雞傳染性法氏囊病中等毒力疫苗的毒種。 采用經(jīng)鑒定合格的雞新城疫低毒力弱毒株(Lasota株)和雞傳染性法氏囊病中等毒力株(NF8株)，分別接種SPF雞胚，收獲感染Lasota尿囊液和NF8絨毛尿囊膜及雞胚組織磨制混合液，進行無菌檢驗和效價測定，合格后以1∶1比例混合，加穩(wěn)定劑后，經(jīng)冷凍真空干燥制成一批雞新城疫(Lasota株)和雞傳染性法氏囊病(NF8株)二聯(lián)活疫苗(以下簡稱二聯(lián)苗)。檢測該批制品，物理

4、形狀、無菌檢驗、外源病毒檢驗、支原體檢驗為合格。其新城疫病毒含量分別為107.0EID50/羽份，法氏囊病毒含量分別為104.50ELD50/羽份。 用10個使用劑量及1個使用劑量的二聯(lián)苗接種SPF雛雞，同時將不免疫的SPF雞與免疫雞關(guān)在同一籠內(nèi)一起飼養(yǎng)21天，進行安全性試驗及免疫擴散試驗。對于10個使用劑量組，觀察14天，全部健活，剖檢10個使用劑量組和對照組部分雞，無新城疫及傳染性法氏囊病特異性病理變化，證明該批疫苗安全性良

5、好；分別于免疫后1周、2周、3周采血測NDV的血凝抑制(HI)抗體和IBDV的中和(SN)抗體，于3周時對免疫雞和非免疫雞分別攻擊ND、IBD強毒，觀察免疫雞和未免疫雞的保護率。結(jié)果表明：當非免疫SPF雞與二聯(lián)苗免疫過的SPF雛雞同居一定的時間后，能使非免雞感染并產(chǎn)生相應(yīng)的NDVHI抗體和IBDVSN抗體。分別攻擊ND強毒和IBD強毒后不會引起免疫雞及同籠飼養(yǎng)未免疫雞產(chǎn)生ND發(fā)病癥狀及法氏囊病變；攻毒后保護指數(shù)皆為100﹪，完全能起到免

6、疫及擴散保護作用。 用ND病毒含量分別為104EID50、5000EID50、103EID50的二聯(lián)苗免疫SPF雛雞后，攻擊ND強毒；用IBD病毒含量為300ELD50、200ELD50、100ELD50二聯(lián)苗免疫SPF雛雞后，攻擊IDB強毒進行二聯(lián)苗的最小免疫量試驗。結(jié)果表明，二聯(lián)苗的最小免疫量ND為5000EID50，IBD為200ELD50。 用二聯(lián)苗、雞新城疫(Lasota株)單苗和雞傳染性法氏囊病(NF8株)單

7、苗分組免疫7日齡SPF雛雞及有母源抗體的雛雞。對SPF雛雞免疫后1周、2周、3周分別采血測抗體并在3周后分別攻擊ND和IBD強毒。對有母源抗體的雛雞實驗分兩部分進行，第一部分(一免組)：一免后1周、2周、3周分別采血測抗體并在3周后分別攻擊ND和IBD強毒；第二部分(二免組)：一免后10天進行第二次免疫，其余步驟同一免組。結(jié)果表明：用二聯(lián)活疫苗免疫SPF雛雞后，NF8株與Lasota株間不產(chǎn)生明顯的相互干擾作用，攻毒保護率與各自的單苗相