雞傳染性法氏囊病毒廣西流行代表毒株免疫原性的研究.pdf

1、傳染性法氏囊病(infectious bursal disease，IBD)是由傳染性法氏囊病病毒(infectious bursal disease virus，IBDV)引起的主要危害幼齡雞的一種急性、高度接觸性的傳染病，除引起發(fā)病、死亡等直接的損失外，還可導(dǎo)致感染雞產(chǎn)生免疫抑制，致使機(jī)體免疫應(yīng)答降低和對(duì)其它疾病的易感性增高，造成更大的損失。基因突變所引起的1BDV超強(qiáng)毒株(very virulent IBDV，vvIBDV)和不同

2、血清亞型的出現(xiàn)，是造成目前現(xiàn)有商品疫苗免疫效力不高或免疫失敗的主要原因之一。因此，及時(shí)分離并篩選具有代表性的地方流行毒株作為研制疫苗的候選毒株，并對(duì)其免疫原性和交叉免疫保護(hù)性進(jìn)行試驗(yàn)就成為一項(xiàng)十分有意義而且非常必需的工作。 在之前的研究中，我們?cè)趯?duì)2000～2006年間分別來(lái)自廣西、江蘇、浙江、安徽、海南5個(gè)省的23個(gè)IBDV分離毒株的主要保護(hù)性抗原蛋白VP2基因的高變區(qū)序列進(jìn)行比較分析后發(fā)現(xiàn)，分離株可明顯分為2群：第1群為屬于

3、經(jīng)典毒株(classicaI IBDV，cIBDV)的10個(gè)弱毒株及2個(gè)中等偏強(qiáng)毒力的分離株，第2群為屬于vvIBDV的11個(gè)分離株。本課題選取分離自廣西的屬第2群的vvIBDV毒株BH11、TSC-2(9)和屬第1群的中等偏強(qiáng)毒力株040124、YL052作為代表，與目前在生產(chǎn)上使用最廣泛的商品疫苗株B87(in)和FW2512一起，進(jìn)行了毒株血清亞型和致病力鑒定、毒株間交叉免疫保護(hù)等研究，目的是篩選出致病性強(qiáng)、免疫原性和免疫交叉保護(hù)

4、性好的毒株作為研制疫苗的種毒。 首先，通過(guò)應(yīng)用免疫兔子制備的抗IBDV高免血清，在雞胚成纖維細(xì)胞(CEF)上對(duì)四個(gè)流行代表株040124、BH11、TSC-2(9)、YL052和2個(gè)疫苗株B87(in)、FW2512進(jìn)行交叉中和試驗(yàn)。結(jié)果顯示，6個(gè)毒株可分成2個(gè)不同的血清亞型：BH11為一個(gè)亞型，YL052、TSC-2(9)、040124與疫苗株B87(in)和FW2512為另一個(gè)亞型；通過(guò)聚類(lèi)分析法分析了各亞型毒株之間的親緣關(guān)

5、性存在一定的差異。 第二，用四個(gè)分離株分別人工感染4周齡非免疫雞，以比較和確定它們的致病性。實(shí)驗(yàn)從致死率、免疫器官指數(shù)(immune organs index，IOI)及法氏囊顯微病理?yè)p傷評(píng)分分別進(jìn)行評(píng)價(jià)。結(jié)果顯示四個(gè)毒株對(duì)實(shí)驗(yàn)雞的發(fā)病率均為100％；在各實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組的IOI比較中差異均顯著(p<0.05)，表明它們均具有一定程度的致病性，但各毒株間的毒力差異較大，040124毒株的致死率(40％)和法氏囊顯微病理?yè)p傷評(píng)分(5

6、分)均為最高。 第三，通過(guò)制備四個(gè)分離株的單價(jià)滅活油乳劑疫苗(OEV)、多價(jià)滅活OEV(040124、TSC-2(9)、BH11)以及參考強(qiáng)毒株CJ801-BKF的OEV，分別進(jìn)行商品疫苗毒株BS7(in)、FW2512對(duì)4個(gè)分離株的免疫保護(hù)試驗(yàn)、各分離株間的免疫交叉保護(hù)試驗(yàn)、多價(jià)滅活苗不同免疫劑量及其與CJ801-BKF株滅活苗的免疫保護(hù)對(duì)比試驗(yàn)。試驗(yàn)分別從攻毒后各毒株疫苗免疫組雞的IOI、免疫保護(hù)指數(shù)(immune prot

7、ection index，IPI)進(jìn)行評(píng)價(jià)。結(jié)果顯示，B87(in)和FW2512疫苗免疫組對(duì)四個(gè)分離株YL052、040124、BH11、TSC-2(9)、的IPl分別為80％、60％、70％、70％和70％、60％、70％、80％，表明這兩個(gè)商品疫苗不能對(duì)流行毒株提供完全的保護(hù)；四個(gè)單價(jià)OEV對(duì)同源毒株均可產(chǎn)生100％保護(hù)，040124的OEV對(duì)BH11、TSC-2(9)、YL052的IPl分別為80％、80％、90％，交叉免疫保護(hù)

8、性最好，其它三個(gè)毒株間的IPI則在40％～70％；在毒株免疫組與未免疫組的IOI比較觀察中發(fā)現(xiàn)，分離株TSC-2(9)和YL052免疫組與未免疫組的差異顯著(P<0.05)，而分離株040124和BH11免疫組與未免疫組的IOI差異則不顯著(P>0.05)，綜合兩項(xiàng)指標(biāo)的結(jié)果，證明毒株040124株的免疫原性最好；多價(jià)OEV三個(gè)免疫劑量的的IPI都在80％以上，最高的達(dá)100％，各免疫劑量的比較中，1mL的免疫組IPI顯著高于0.25m

9、L的免疫組(P<0.05)，而1mL免疫組與0.5mL免疫組差異不顯著(P>0.05)，可以確定0.5mL為多價(jià)OEV的最佳免疫劑量；應(yīng)用最佳免疫劑量的多價(jià)OEV所進(jìn)行的免疫保護(hù)試驗(yàn)中，發(fā)現(xiàn)它對(duì)四個(gè)分離株的IPI達(dá)90％以上，而CJ801-BKF株滅活OEV對(duì)各BH11、TSC-2(9)、YL052、040124的IPl分別只有65％、75％、60％、50％；在對(duì)多價(jià)OEV、4個(gè)單價(jià)OEV和CJ801-BKF株OEV的IPI比較中，多價(jià)

10、OEV的免疫效力顯著高于YL052、TSC-2(9)株和CJ801-BKF株的OEV(P<0.05)，各毒株OEV之間及其與CJ801-BKF株OEV以及多價(jià)OEV與毒株040124、BH11株OEV之間的差異均不顯著(P>0.05)。綜合以上結(jié)果，證明本研究制備的多價(jià)滅活OEV的免疫效力最高,適用于本地IBD的防制。 本課題研究的結(jié)果表明，廣西存在不同的IBDV血清亞型的流行，商品疫苗B87(in)和FW2512已不能對(duì)流行毒