應用基因芯片技術對股骨頭壞死差異表達基因的研究.pdf

1、研究背景及目的： 股骨頭壞死是由多種病因引起股骨頭血供障礙所造成的最終結(jié)果，致殘率高，是臨床上亟待解決的重大難題。關于ONFH的發(fā)病機理有10余種假說，主要為脂質(zhì)代謝紊亂、骨內(nèi)壓增高、骨髓基質(zhì)干細胞的成脂分化、微血管損傷及血管內(nèi)凝血，但其分子水平的發(fā)病機制仍不清楚?；蛐酒夹g(genechiptechnology)，又稱cDNA微陣列技術(cDNAmicroarraytechnology)，可同時檢測成百上千個基因的表達。自從

2、九十年代初美國Affymetrix公司Fodor等首先開展基因芯片技術以來，該技術己被成功地應用于基因功能研究的各個領域，進行的大規(guī)?；虮磉_已成為研究病理生理過程的卓有成效的研究方法。但目前尚未見基因芯片技術研究股骨頭壞死發(fā)病機制的報道。本研究擬以基因芯片技術為基本手段，從全基因組水平對不同病因ONFH基因表達譜分析，并用RT-PCR方法進行驗證，探討其在分子水平的發(fā)病機制，為預防、診斷和治療ONFH提供新的策略。 方法：

3、 收集1例正常股骨頭組織和6例ONFH標本，其中創(chuàng)傷性ONFH3例、激素性ONFH3例，對入選標本進行影像學和組織學觀察，明確ONFH的診斷；應用Arrayvisio、Genespring和自組織圖(Self-organizingmap，SOM)等軟件分析數(shù)據(jù)檢測基因芯片技術平臺的穩(wěn)定性，利用RealtimePCR方法驗證平臺的可靠性。抽提所有標本的總RNA，分別逆轉(zhuǎn)錄成cDNA，摻入熒光標記，與含有12722條靶基因的人類基因表達

4、譜芯片雜交，經(jīng)過信號掃描，微陣列圖像分析，計算機軟件處理數(shù)據(jù)，得到二者間基因表達的差異信息；采用RT-PCR方法，對挑選出的基因NBL1和PDGFRB進行驗證。 結(jié)果： 實驗組6例樣本經(jīng)影像學和組織學證實為ONFH，1例正常對照樣本無異常改變。在創(chuàng)傷性ONFH組和正常股骨頭之間有差異表達基因238條，上調(diào)基因74條，下調(diào)基因164條；激素性ONFH組和正常股骨頭之間有差異表達基因138個，上調(diào)基因39條，下調(diào)基因99條。

5、調(diào)變基因涉及的功能分為7大類，包括：細胞分裂(Celldivision)、信號傳導(Cellsignaling)、細胞結(jié)構(gòu)(Cellstruture)、細胞防御(Cell/organismdefense)、表達(Gene/proteinexpression)、代謝(metabolism)和未分類基因(Unclassified)?；騈BL1和PDGFRB的RT-PCR驗證結(jié)果與基因芯片結(jié)果相吻合。 結(jié)論： (1)ONFH