晚期酒精性股骨頭壞死骨組織中相關(guān)基因的表達(dá).pdf

1、背景與目的:
　　自從1922年Axhausen報(bào)道了酒精中毒的病人容易患骨壞死疾病以來(lái)，人們就一直在探究股骨頭壞死（Osteonecrosisofthefemoralhead，ONFH）與酒精之間的關(guān)系。1968年Jones發(fā)現(xiàn)酒精中毒引起的股骨頭軟骨下骨壞死具備骨壞死的所有特征。近年來(lái)，伴隨著人民生活水平的提高，飲酒的人愈來(lái)愈多，酒精的消耗量也不斷增加，酒精性股骨頭壞死患者在逐年增加。現(xiàn)在已有明確證據(jù)顯示酒精為導(dǎo)致股骨頭壞死的

2、病因之一。
　　關(guān)于股骨頭壞死的發(fā)病機(jī)理學(xué)說(shuō)有多種，如脂肪栓塞學(xué)說(shuō)、高凝低纖溶學(xué)說(shuō)、骨內(nèi)高壓及靜脈瘀滯學(xué)說(shuō)、微血管損傷學(xué)說(shuō)以及骨質(zhì)疏松學(xué)說(shuō)等。以往人們研究酒精性O(shè)NFH的病理變化，發(fā)現(xiàn)早期酒精性O(shè)NFH股骨頭內(nèi)脂肪髓（脂肪堆積），脂質(zhì)代謝紊亂，脂肪細(xì)胞增殖肥大，壓迫毛細(xì)血管及血管竇，造成骨內(nèi)高壓及靜脈回流障礙。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)酒精調(diào)控股骨頭細(xì)胞內(nèi)成脂基因表達(dá)升高，成骨基因表達(dá)下降，并且酒精誘導(dǎo)骨髓多功能干細(xì)胞系成脂分化，抑制其成骨分

3、化，加重股骨頭內(nèi)脂肪堆積而骨修復(fù)不足的病理過(guò)程從而導(dǎo)致股骨頭的缺血壞死。晚期酒精性O(shè)NFH(ARCOⅢ-Ⅳ期)病理表現(xiàn)典型:軟骨下骨折，骨量減少，壞死區(qū)面積特別大，有大塊壞死骨，周圍修復(fù)硬化帶明顯，股骨頭塌陷、變形。但是目前尚不清楚壞死區(qū)骨組織細(xì)胞中相關(guān)基因的表達(dá)情況，國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)亦未見(jiàn)報(bào)道。故本研究收集人類酒精性O(shè)NFH患者股骨頭標(biāo)本，采用實(shí)時(shí)熒光定量-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-qPCR)技術(shù)檢測(cè)股骨頭壞死區(qū)內(nèi)骨形態(tài)發(fā)生蛋白-2（BMP-2）

4、、成骨轉(zhuǎn)錄因子-2(Runx-2)、過(guò)氧化物酶體增殖子活化受體-γ(PPAR-γ)、護(hù)骨素(osteoprotegerin，OPG)、破骨細(xì)胞分化因子(receptoractivatorofNF.KBligand，RANKL)mRNA的表達(dá)情況，進(jìn)一步探討晚期酒精性O(shè)NFH壞死區(qū)骨組織細(xì)胞中相關(guān)基因表達(dá)的變化，對(duì)晚期酒精性O(shè)NFH治療措施的選擇有一定的參考價(jià)值。
　　材料與方法:
　　2013年1月～2013年6月，收集10

5、例ARCOⅢ-Ⅳ期(ARCOⅢ-B期3例，ARCOⅢ-C期3例，ARCOⅣ期4例)酒精性股骨頭壞死患者股骨頭骨組織和10例GardenⅢ-Ⅳ期（GardenⅢ期5例，GardenⅣ期5例）新鮮股骨頸骨折患者股骨頭骨組織，分別作為實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組。實(shí)驗(yàn)組為晚期酒精性股骨頭壞死患者，男8例，女2例，年齡33～60歲，平均45歲，無(wú)激素應(yīng)用史、感染、創(chuàng)傷等其他病史。對(duì)照組男6例，女4例，年齡44～70歲，平均52歲，術(shù)前病程3-7天，平均5天，

6、無(wú)飲酒史、激素應(yīng)用史及其他病史。實(shí)驗(yàn)中觀察股骨頭大體標(biāo)本形態(tài)，壞死區(qū)面積大小、顏色、質(zhì)地，再采用RT-qPCR技術(shù)分別測(cè)定兩組股骨頭骨組織中BMP-2、Runx-2、PPAR-γ、OPG、RANKLmRNA的相對(duì)表達(dá)量。
　　結(jié)果:
　　RT-qPCR檢測(cè)各目的基因的Ct值，最后采用2-ΔΔCt法分析實(shí)驗(yàn)組相對(duì)于對(duì)照組目的基因表達(dá)變化的倍數(shù)，本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示實(shí)驗(yàn)組壞死區(qū)骨組織中BMP-2、Runx-2、PPAR-γ、OPG、R