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文檔簡(jiǎn)介
1、背景:乳腺增生泛指乳腺纖維組織和上皮增生,進(jìn)行性結(jié)締組織的生長(zhǎng)以及乳小葉和乳腺組織導(dǎo)管結(jié)構(gòu)上的進(jìn)行性病變。乳腺增生發(fā)病的主要原因是由于內(nèi)分泌激素失調(diào)。乳腺炎是以乳腺組織炎性細(xì)胞浸潤(rùn)、內(nèi)皮功能受損、大量促炎細(xì)胞因子分泌為特點(diǎn),并常伴隨組織氧化應(yīng)激狀態(tài)的一種乳腺疾病。本文首先采用了正交設(shè)計(jì)優(yōu)化了玫瑰花總黃酮純化工藝并通過(guò)急性和亞急性毒理實(shí)驗(yàn)明確了其口服安全性,再利用現(xiàn)代藥理學(xué)研究方法,通過(guò)觀察玫瑰花總黃酮對(duì)乳腺增生、乳腺炎大鼠的治療作用,探
2、討其治療機(jī)制,為其在臨床上的應(yīng)用及進(jìn)一步的制劑開(kāi)發(fā)提供了可靠的依據(jù)。
方法:靜態(tài)吸附與洗脫考察 AB-8(弱極性)、HPD826(氫?。P D500(極性)和ADS-17(中極性+氫?。┧姆N大孔樹(shù)脂對(duì)玫瑰花總黃酮純化的適用性,動(dòng)態(tài)吸附洗脫條件用正交設(shè)計(jì)法進(jìn)行優(yōu)化。其口服安全性通過(guò)急性亞急性毒理試驗(yàn)評(píng)價(jià)。采用24hpf(hours post f ertilization)健康TG(VEGFR2: GFP)系血管熒光轉(zhuǎn)基因斑馬
3、魚(yú)作為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物用以獲得血管生成模型,同時(shí)加入不同劑量的玫瑰花總黃酮提取物與斑馬魚(yú)胚胎孵育24h,背部節(jié)間血管(intersegmental vesse ls,ISV)的生成情況在熒光顯微鏡下進(jìn)行觀察,通過(guò)計(jì)數(shù)評(píng)價(jià)玫瑰花總黃酮血管抑制程度。給予Wistar雌性大鼠肌肉注射雌激素(0.5mg·kg-1)25天,在隨后的5天肌肉注射孕激素(5mg·kg-1)用以誘導(dǎo)大鼠乳腺增生(HMG)模型。同時(shí)給予大鼠玫瑰花總黃酮灌胃30天,屆時(shí)對(duì)血液雌二
4、醇和氧化應(yīng)激水平進(jìn)行測(cè)定,乳腺中AKT和JNK的表達(dá)通過(guò)免疫印跡分析進(jìn)行評(píng)估,NFκB-p65,COX-2和VEGF的表達(dá)則通過(guò)免疫組化進(jìn)行分析。大鼠乳腺炎模型使用脂多糖注射產(chǎn)后母鼠誘導(dǎo),觀察玫瑰花總黃酮(200和100mg·kg-1?d-1)給藥干預(yù)對(duì)乳腺組織切片形態(tài)學(xué)變化、乳腺氧化應(yīng)激和炎癥應(yīng)激水平的影響。
結(jié)果:綜合考慮,玫瑰花總黃酮最佳純化工藝為按照0.5mg?ml-1的上樣濃度,1ml?min-1的上樣流速,4倍于柱
5、體積的洗脫體積和2ml?min-1的洗脫流速純化。低于劑量500mg·kg-1?d-1的口服給藥是安全的。玫瑰花總黃酮20ug?ml-1和50ug?ml-1濃度下,斑馬魚(yú)血管生成受到了一定的抑制作用。檢測(cè)結(jié)果顯示相較于 HMG組200mg·kg-1?d-1組大鼠體內(nèi)雌激素和丙二醛水平顯著降低(雌激素從32.53±1.08降低到25.71±0.96;MDA從6.96±0.90降低到4.47±0.40nmol?ml-1)。同時(shí)增加了總抗氧化
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