玫瑰花乳腺保護活性研究.pdf

1、背景：乳腺增生泛指乳腺纖維組織和上皮增生，進行性結(jié)締組織的生長以及乳小葉和乳腺組織導(dǎo)管結(jié)構(gòu)上的進行性病變。乳腺增生發(fā)病的主要原因是由于內(nèi)分泌激素失調(diào)。乳腺炎是以乳腺組織炎性細胞浸潤、內(nèi)皮功能受損、大量促炎細胞因子分泌為特點，并常伴隨組織氧化應(yīng)激狀態(tài)的一種乳腺疾病。本文首先采用了正交設(shè)計優(yōu)化了玫瑰花總黃酮純化工藝并通過急性和亞急性毒理實驗明確了其口服安全性，再利用現(xiàn)代藥理學研究方法，通過觀察玫瑰花總黃酮對乳腺增生、乳腺炎大鼠的治療作用，探

2、討其治療機制，為其在臨床上的應(yīng)用及進一步的制劑開發(fā)提供了可靠的依據(jù)。
　　方法：靜態(tài)吸附與洗脫考察 AB-8（弱極性）、HPD826（氫?。P D500（極性）和ADS-17（中極性+氫?。┧姆N大孔樹脂對玫瑰花總黃酮純化的適用性，動態(tài)吸附洗脫條件用正交設(shè)計法進行優(yōu)化。其口服安全性通過急性亞急性毒理試驗評價。采用24hpf（hours post f ertilization)健康TG（VEGFR2: GFP)系血管熒光轉(zhuǎn)基因斑馬

3、魚作為實驗動物用以獲得血管生成模型，同時加入不同劑量的玫瑰花總黃酮提取物與斑馬魚胚胎孵育24h，背部節(jié)間血管(intersegmental vesse ls，ISV)的生成情況在熒光顯微鏡下進行觀察，通過計數(shù)評價玫瑰花總黃酮血管抑制程度。給予Wistar雌性大鼠肌肉注射雌激素（0.5mg·kg-1）25天，在隨后的5天肌肉注射孕激素（5mg·kg-1）用以誘導(dǎo)大鼠乳腺增生（HMG）模型。同時給予大鼠玫瑰花總黃酮灌胃30天，屆時對血液雌二

4、醇和氧化應(yīng)激水平進行測定，乳腺中AKT和JNK的表達通過免疫印跡分析進行評估，NFκB-p65,COX-2和VEGF的表達則通過免疫組化進行分析。大鼠乳腺炎模型使用脂多糖注射產(chǎn)后母鼠誘導(dǎo)，觀察玫瑰花總黃酮（200和100mg·kg-1?d-1）給藥干預(yù)對乳腺組織切片形態(tài)學變化、乳腺氧化應(yīng)激和炎癥應(yīng)激水平的影響。
　　結(jié)果：綜合考慮，玫瑰花總黃酮最佳純化工藝為按照0.5mg?ml-1的上樣濃度，1ml?min-1的上樣流速，4倍于柱

5、體積的洗脫體積和2ml?min-1的洗脫流速純化。低于劑量500mg·kg-1?d-1的口服給藥是安全的。玫瑰花總黃酮20ug?ml-1和50ug?ml-1濃度下，斑馬魚血管生成受到了一定的抑制作用。檢測結(jié)果顯示相較于 HMG組200mg·kg-1?d-1組大鼠體內(nèi)雌激素和丙二醛水平顯著降低（雌激素從32.53±1.08降低到25.71±0.96；MDA從6.96±0.90降低到4.47±0.40nmol?ml-1）。同時增加了總抗氧化