燈盞花素對(duì)大鼠急性脊髓損傷保護(hù)作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：改良Allen’S法打擊造成大鼠急性脊髓損傷(SCI)的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型，通過檢測(cè)脊髓損傷后不同時(shí)間點(diǎn)對(duì)照組和燈盞花素治療組NF-к BP65、MCP-1、PARP-1表達(dá)差異，檢測(cè)脊髓損傷24小時(shí)神經(jīng)細(xì)胞凋亡及Bcl-2的表達(dá)差異，觀察對(duì)照組和燈盞花素治療組不同的病理特征，用來觀察燈盞花素對(duì)急性脊髓損傷的影響，探討其對(duì)急性脊髓損傷的保護(hù)機(jī)制，為臨床上急性脊髓損傷的治療提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法：健康成年雄性SD大鼠52只，體重25

2、0±30g。隨機(jī)分為2組：對(duì)照組(n=24)，燈盞花素治療組(n=24)。另取4只成年健康雄性SD大鼠，作為空白對(duì)照組。大鼠稱重，按30 mg·kg<'-1>腹腔注射3％戊巴比妥鈉麻醉。俯臥固定于手術(shù)臺(tái)上，備皮，常規(guī)消毒鋪巾。以脊柱為中心縱行切開背部皮膚和皮下組織，剝離兩側(cè)椎旁肌肉，自動(dòng)拉鉤牽開暴露T6-8棘突和椎板，咬除T7棘突和椎板，除去硬膜外脂肪，暴露硬膜囊，預(yù)打擊脊髓上放置0.4cmx0.5cm墊片。采用改良Allen’S打擊法

3、(10g×5cmf)損傷脊髓，以雙下肢猛烈抽搐，造成截癱為有效打擊，關(guān)閉傷口。術(shù)后室溫控制在20℃～28℃，所有動(dòng)物每日肌注青霉素鈉10萬U．并用碘伏消毒傷口，每8h擠壓膀胱排尿，定時(shí)喂食、水。燈盞花素治療組(n=24)動(dòng)物術(shù)后腹腔注射燈盞花素，總量5 mg/kg·d，分兩次注射；對(duì)照組(n=24)動(dòng)物術(shù)后腹腔注射等量生理鹽水。熒光免疫組化檢測(cè)法檢測(cè)脊髓損傷后4h、12h、24h、72h不同時(shí)間點(diǎn)燈盞花素治療組和對(duì)照組NF-кB P65

4、、MCP-1表達(dá)差異、檢測(cè)24h兩組Bcl-2表達(dá)差異，TUNEL 法檢測(cè)24h燈盞花素治療組和對(duì)照組細(xì)胞凋亡情況，免疫組化SP法檢測(cè)檢測(cè)脊髓損傷后4h、12h、24h72 h不同時(shí)間點(diǎn)燈盞花素治療組和對(duì)照組PARP-1表達(dá)差異并進(jìn)行病理觀察。 結(jié)果：在12h、24h時(shí)間點(diǎn)上，治療組NF-кB p65熒光強(qiáng)度分析結(jié)果與對(duì)照組差異有顯著性(p<0.05)；在12h、24h時(shí)間點(diǎn)上，對(duì)照組著MCP-1熒光強(qiáng)度分析結(jié)果與治療組差異有顯

5、性(p<0.05)；細(xì)胞記數(shù)結(jié)果顯示，在12h、24h時(shí)間點(diǎn)上，對(duì)照組PARP-1陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)與治療組差異有顯著性(p<0.05)。熒光強(qiáng)度分析顯示，治療組Bcl-2熒光強(qiáng)度(84.494±8.363)與治療組(71.622±6.583)差異有顯著性(p<0.05)；TUNEL法檢測(cè)細(xì)胞凋亡，治療組的凋亡指數(shù)(35.48±4.54)少于對(duì)照組(42.34±4.64)，差異有顯著性(P<0.05)。病理觀察結(jié)果顯示，假手術(shù)組無損傷性改變，治