山仔水華微囊藻毒素免疫毒性實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的： 研究山仔水華微囊藻毒素的特異性免疫毒性和非特異性免疫毒性并探討其部分免疫毒性機(jī)制。 方法： 1.山仔水華微囊藻毒素對(duì)體外培養(yǎng)小鼠免疫細(xì)胞的損害 無(wú)菌取脾細(xì)胞，用RPMI1640完全培養(yǎng)基稀釋成2．5×106／m1的脾細(xì)胞懸液加入96孔平底培養(yǎng)板中，染毒劑量是0、l、5、10μgMC-LR／ml，平行作6孔，觀察MC-LR對(duì)小鼠T、B淋巴細(xì)胞增殖的影響：無(wú)菌取小鼠腹腔巨噬細(xì)胞，用RPMI1640完全

2、培養(yǎng)基稀釋成1×104／ml，染毒劑量是0、1、5、10μgMC-LR／ml，平行作6孔，觀察MC—LR作用24、48和72小時(shí)對(duì)小鼠巨噬細(xì)胞的毒性作用。 2．山仔水華微囊藻毒素對(duì)整體動(dòng)物免疫功能影響的研究 四十只雄性清潔級(jí)ICR小鼠按體重隨機(jī)分成四組，每組10只，腹腔注射微囊藻毒素O，8，16，24μgMC-LR/kg，連續(xù)7d。于第8d處死動(dòng)物，取脾臟和胸腺。用遲發(fā)型超敏反應(yīng)(DTH)來(lái)觀察微囊藻毒素對(duì)小鼠細(xì)胞免疫功

3、能的影響，以血清溶血素(HC50)觀察微囊藻毒素對(duì)小鼠體液免疫的影響：碳廓清實(shí)驗(yàn)檢測(cè)小鼠巨噬細(xì)胞吞噬功能；胸腺和脾臟常規(guī)HE染色病理檢查：用試劑盒檢測(cè)脾臟超氧化物岐化酶(SOD)、谷胱甘肽過(guò)氧化酶(GSH-PX)、丙二醛(MDA)和乳酸脫氫酶(LDH)活力，來(lái)觀察染毒小鼠脾臟氧化應(yīng)激反應(yīng)。 3．山仔水華微囊藻毒素對(duì)小鼠外周血白細(xì)胞和淋巴細(xì)胞亞群的影響： 四十只雄性清潔級(jí)ICR小鼠按體重隨機(jī)分成四組，每組10只，腹腔注射微

4、囊藻毒素O，8，16，24μgMC-LR／kg，連續(xù)7d。第8d處死動(dòng)物，挖眼球取血。自動(dòng)血球分析儀檢測(cè)白細(xì)胞的數(shù)量、分類(lèi)及紅細(xì)胞、血小板：流式細(xì)胞儀檢測(cè)CD4+、CD8+T淋巴細(xì)胞亞群的百分比， 結(jié)果： 1.山仔水華微囊藻毒素對(duì)體外培養(yǎng)小鼠免疫細(xì)胞的損害 1.1l，5，lOμgMC-LR／ml劑量組脾臟的T淋巴細(xì)胞刺激指數(shù)SI顯著下降，與對(duì)照組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0．05)：5，10μgMC-LR/ml劑量組

5、B淋巴細(xì)胞刺激指數(shù)SI顯著下降，與對(duì)照組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0．05)。 1.2染毒24小時(shí)各劑量組腹腔巨噬細(xì)胞的增殖能力與空白對(duì)照組比較無(wú)明顯變化，48小時(shí)以后各劑量組腹腔巨噬細(xì)胞增殖能力有不同程度的抑制，染毒48小時(shí)5，10μgMC-LR／ml劑量組腹腔巨噬細(xì)胞增殖能力顯著下降，染毒72小時(shí)1，5，10μgMC-LR／m1劑量組腹腔巨噬細(xì)胞增殖能力顯著降低，與對(duì)照組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0．05)，呈現(xiàn)一定的時(shí)間和劑量關(guān)系

6、。 2．山仔水華微囊藻毒素對(duì)整體動(dòng)物免疫功能影響的研究 2．1與對(duì)照組比較，8μgMC-LR／kg劑量組脾臟明顯腫大(P<0．05)，16，24μgMC-LR／kg劑量組脾體比有降低趨勢(shì)，24μgMC-LR／kg劑量組胸腺明顯萎縮，與對(duì)照組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0．05)：16，24μgMC-LR／kg劑量組小鼠DTH明顯下降，24μgMC-LR／kg劑量組小鼠HC50明顯下降(P<0．05)，24μgMC-LR／kg劑

7、量組小鼠吞噬指數(shù)下降，與對(duì)照組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0．05)。 2．2胸腺、脾臟病理檢查發(fā)現(xiàn)，16，24μgMC-LR/kg劑量組胸腺皮質(zhì)變薄，髓質(zhì)區(qū)擴(kuò)大，皮、髓交界模糊，皮質(zhì)區(qū)淋巴細(xì)胞減少，24μgMC-LR／kg劑量組小鼠脾小體明顯縮小，淋巴細(xì)胞數(shù)減少。 2．324μgMC-LR／kg劑量組小鼠脾臟LDH水平明顯升高，SOD和GSH—PX活性顯著降低，與對(duì)照組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P

8、微囊藻毒素對(duì)小鼠白細(xì)胞和外周血淋巴細(xì)胞亞群的影響 各劑量染毒組小鼠外周血白細(xì)胞數(shù)量明顯減少，16，24μgMC-LR／kg劑量組淋巴細(xì)胞的比例下降，與對(duì)照組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0．05)：各劑量染毒組對(duì)紅細(xì)胞、血紅蛋白和血小板數(shù)量無(wú)明顯改變；16，24μgMC-LR／kg劑量組CD4+T淋巴細(xì)胞百分比顯著下降，與對(duì)照組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P

9、C50和脾T、B淋巴細(xì)胞的增殖，導(dǎo)致機(jī)體特異性免疫功能損傷；還可以降低小鼠的碳廓清吞噬能力和腹腔巨噬細(xì)胞的增殖能力，損傷機(jī)體非特異性免疫功能。 2．山仔水華微囊藻毒素使小鼠胸腺皮質(zhì)變薄，髓質(zhì)區(qū)擴(kuò)大，皮、髓交界模糊，皮質(zhì)區(qū)淋巴細(xì)胞減少，小鼠脾小體明顯縮小，淋巴細(xì)胞數(shù)減少，提示微囊藻毒素具有胸腺和脾臟毒作用，影響免疫細(xì)胞的發(fā)育、成熟和功能的發(fā)揮。 3．山仔水華微囊藻毒素明顯降低脾臟超氧化物岐化酶(SOD)、谷胱甘肽過(guò)氧化酶(