RSV在昆蟲介體灰飛虱體內(nèi)的卵傳機制及其非水稻寄主的初步研究.pdf

1、通過對攜帶水稻條紋病毒(RSV)的灰飛虱(SBPH)卵巢進行超薄切片透射電鏡直接觀察和超薄切片免疫電鏡定位觀察，確定病毒粒子在灰飛虱卵巢中的分布情況，初步探討RSV在介體灰飛虱體內(nèi)的卵傳機制。通過蛋白免疫印跡法探討灰飛虱體內(nèi)的傳毒相關蛋白。 超薄切片透射電鏡直接觀察結(jié)果顯示，在卵巢的生殖區(qū)中有正在發(fā)育的卵細胞，被濾泡細胞所包圍。在濾泡細胞中聚積了許多形狀各異的內(nèi)含體。這些內(nèi)含體電子密度高，與細胞質(zhì)明顯不同，放大后呈砂粒狀結(jié)構或是

2、呈平行排列的絲狀結(jié)構，與在水稻中電鏡觀察到的RSV粒子團塊極為相似?？梢哉J為病毒粒子成束狀緊密排列成團塊，這些病毒團塊被橫切后呈砂粒狀結(jié)構，縱切后呈平行排列的絲狀結(jié)構，斜縱切則砂粒狀結(jié)構和細絲狀結(jié)構同時出現(xiàn)，可清晰地看到細絲直徑約為3-8nm。 通過超薄切片免疫電鏡可觀察到在卵殼片層上分布有大量的金顆粒，散布比較均勻，即說明在卵殼上分布著RSV粒體。在消化道的中腸細胞、卵細胞中散布著金顆粒，表明在這兩處都存在病毒粒子，與前人的報

3、道一致。卵殼是由濾泡細胞分泌的卵殼蛋白堆積而成，因此卵殼中的RSV來自于濾泡細胞，進而可以推測濾泡細胞中的病毒粒子會隨著濾泡細胞向卵細胞分泌營養(yǎng)物質(zhì)時進入卵細胞。 2005年春季江蘇蘇北地區(qū)大片麥田出現(xiàn)類似RSV病狀的田間癥狀，對此進行田間調(diào)查、實驗室鑒定，確定病原是否為RSV。收集RSV的野生禾本科寄主種子進行室內(nèi)灰飛虱接種傳毒試驗，確定RSV野生禾本科寄主的獲毒潛能。對春季麥田中的RSV野生禾本科寄主進行帶毒率測定。

4、 在東海、阜寧、大豐等地的田間對發(fā)病嚴重的麥田進行癥狀、灰飛虱發(fā)生量、病株分布情況等調(diào)查，以及病株與灰飛虱發(fā)生量的相關性分析，經(jīng)實驗室免疫學檢測、RT-PCR分子生物學檢測確定危害江蘇省蘇北地區(qū)大面積麥田的病原物為RSV。該病毒是由上一年從水稻上獲得RSV的越冬代灰飛虱早春危害麥苗，導致RSV在小麥上大面積發(fā)生。 室內(nèi)野生禾本科寄主灰飛虱接種傳毒試驗顯示稗草、旱稗、狗尾草、升馬唐獲毒率較高，達到38％-50％，表明野生禾本科寄主