RSV在昆蟲介體灰飛虱體內(nèi)的卵傳機(jī)制及其非水稻寄主的初步研究.pdf

1、通過對(duì)攜帶水稻條紋病毒(RSV)的灰飛虱(SBPH)卵巢進(jìn)行超薄切片透射電鏡直接觀察和超薄切片免疫電鏡定位觀察，確定病毒粒子在灰飛虱卵巢中的分布情況，初步探討RSV在介體灰飛虱體內(nèi)的卵傳機(jī)制。通過蛋白免疫印跡法探討灰飛虱體內(nèi)的傳毒相關(guān)蛋白。 超薄切片透射電鏡直接觀察結(jié)果顯示，在卵巢的生殖區(qū)中有正在發(fā)育的卵細(xì)胞，被濾泡細(xì)胞所包圍。在濾泡細(xì)胞中聚積了許多形狀各異的內(nèi)含體。這些內(nèi)含體電子密度高，與細(xì)胞質(zhì)明顯不同，放大后呈砂粒狀結(jié)構(gòu)或是

2、呈平行排列的絲狀結(jié)構(gòu)，與在水稻中電鏡觀察到的RSV粒子團(tuán)塊極為相似。可以認(rèn)為病毒粒子成束狀緊密排列成團(tuán)塊，這些病毒團(tuán)塊被橫切后呈砂粒狀結(jié)構(gòu)，縱切后呈平行排列的絲狀結(jié)構(gòu)，斜縱切則砂粒狀結(jié)構(gòu)和細(xì)絲狀結(jié)構(gòu)同時(shí)出現(xiàn)，可清晰地看到細(xì)絲直徑約為3-8nm。 通過超薄切片免疫電鏡可觀察到在卵殼片層上分布有大量的金顆粒，散布比較均勻，即說明在卵殼上分布著RSV粒體。在消化道的中腸細(xì)胞、卵細(xì)胞中散布著金顆粒，表明在這兩處都存在病毒粒子，與前人的報(bào)

3、道一致。卵殼是由濾泡細(xì)胞分泌的卵殼蛋白堆積而成，因此卵殼中的RSV來(lái)自于濾泡細(xì)胞，進(jìn)而可以推測(cè)濾泡細(xì)胞中的病毒粒子會(huì)隨著濾泡細(xì)胞向卵細(xì)胞分泌營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)時(shí)進(jìn)入卵細(xì)胞。 2005年春季江蘇蘇北地區(qū)大片麥田出現(xiàn)類似RSV病狀的田間癥狀，對(duì)此進(jìn)行田間調(diào)查、實(shí)驗(yàn)室鑒定，確定病原是否為RSV。收集RSV的野生禾本科寄主種子進(jìn)行室內(nèi)灰飛虱接種傳毒試驗(yàn)，確定RSV野生禾本科寄主的獲毒潛能。對(duì)春季麥田中的RSV野生禾本科寄主進(jìn)行帶毒率測(cè)定。

4、 在東海、阜寧、大豐等地的田間對(duì)發(fā)病嚴(yán)重的麥田進(jìn)行癥狀、灰飛虱發(fā)生量、病株分布情況等調(diào)查，以及病株與灰飛虱發(fā)生量的相關(guān)性分析，經(jīng)實(shí)驗(yàn)室免疫學(xué)檢測(cè)、RT-PCR分子生物學(xué)檢測(cè)確定危害江蘇省蘇北地區(qū)大面積麥田的病原物為RSV。該病毒是由上一年從水稻上獲得RSV的越冬代灰飛虱早春危害麥苗，導(dǎo)致RSV在小麥上大面積發(fā)生。 室內(nèi)野生禾本科寄主灰飛虱接種傳毒試驗(yàn)顯示稗草、旱稗、狗尾草、升馬唐獲毒率較高，達(dá)到38％-50％，表明野生禾本科寄主