帶毒灰飛虱唾液腺差異表達蛋白在介體傳毒中的功能研究.pdf

1、灰飛虱Laodelphax striatellus，屬于半翅目飛虱科，是水稻條紋病毒(Rice stripe virus，RSV)的主要傳播媒介。RSV是纖細病毒屬的代表成員，主要由灰飛虱以循回增殖的方式進行傳播。RSV在灰飛虱體內增殖后，必須跨越唾液腺屏障，在介體取食時隨分泌的唾液傳播至健康植株。然而RSV克服唾液腺屏障的機制尚不明確。前期研究發(fā)現(xiàn)了6個在帶毒灰飛虱唾液腺中上調表達的蛋白:α-亞基-ATP合酶ATP synthase

2、subunit alpha(LsATP)、線粒體內膜移位酶Mitochondrial import inner membrane translocase(LsMIT)、蘋果酸脫氫酶NADP-dependent malic enzyme(LsNADP)、微管蛋白-α-2 Tubulin alpha-2(LsTUB)、泛素-60s核糖體LA0前體Ubiquitin-60S ribosomal protein L40 precursor(Ls

3、UBI)以及電壓依賴型陰離子通道蛋白Voltage-dependent anion-selective channel(LsVDAC)。并且LsATP、LsMIT、LsNADP、LsTUB、LsUBI和LsVDAC基因的mRNA水平在灰飛虱唾液腺和全身中都顯著上調表達。采用RNAi研究了LsATP、LsMIT及LsTUB對灰飛虱傳毒率的影響，發(fā)現(xiàn)干擾Ls TUB顯著抑制灰飛虱傳毒。本論文繼續(xù)通過RNAi技術研究LsUBI、LsNADP、

4、LsVDAC對灰飛虱傳播RSV的影響，并探討了對傳毒有影響的基因對灰飛虱各組織中RSV量的影響。主要研究結果如下:
　　(1)利用飼喂法RNAi研究了LsUBI、LsNADP、LsVDAC對灰飛虱RSV傳播效率的影響。供試灰飛虱取食了含有dsRNA的人工飼料后，蟲體內LsUBI、LsNADP、LsVDAC的相對表達量較對照分別下降了75.8％、77.8％、77.4％,表明RNA干擾效果明顯。取食了含dsLsNADP和dsLsVDA

5、C的人工飼料后，灰飛虱傳毒率無明顯改變。取食含dsLsUBI的人工飼料后帶毒灰飛虱的傳毒率為4.0％，僅為對照的12.1％，表明LsUBI對帶毒灰飛虱的傳毒效率有明顯促進作用。
　　(2)為探討LsTUB和LsUBI影響傳毒率的機制，采用RNAi技術研究了Ls TUB和LsUBI對灰飛虱各組織內RSV量的影響。LsTUB和LsUBI在灰飛虱的唾液腺、中腸、卵巢、血淋巴中均有分布。取食含dsLsTUB的人工飼料后，灰飛虱唾液腺、中腸