實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)大腸癌腹腔微轉(zhuǎn)移及其臨床意義的研究.pdf

1、大腸癌為常見多發(fā)的消化道惡性腫瘤,隨著生活水平的提高和飲食習(xí)慣的改變,大腸癌的人群患病率有所上升,并有年輕化趨向.大腸癌病人盡管接受了以手術(shù)為主的根治術(shù),但臨床上仍有50﹪的大腸癌患者死于術(shù)后的腫瘤局部復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移,成為手術(shù)治療失敗的主要原因.因此應(yīng)用先進(jìn)的分子生物學(xué)技術(shù)、建立定量熒光RT-PCR方法檢測(cè)大腸癌腫瘤標(biāo)志物、術(shù)后轉(zhuǎn)移的早期診斷受到高度重視. 本項(xiàng)研究應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)大腸癌腹腔內(nèi)游離癌細(xì)胞及探討其臨床意義

2、.從2003年5月至2004年1月,收集在日本愛知癌癥中心手術(shù)81例大腸癌病例,應(yīng)用隨機(jī)引物和寡核苷酸引物,檢測(cè)大腸癌病人手術(shù)腹腔沖洗液中游離細(xì)胞的癌胚抗原(CEA)mRNA和細(xì)胞角蛋白20(CK-20)mRNA雙重特異性標(biāo)志物,并檢測(cè)3磷酸甘油醛脫氫酶(GAPDH)mRNA為內(nèi)參因子.并在羅氏的實(shí)時(shí)熒光定量PCR(LightCycler)上進(jìn)行定量分析.樣本同時(shí)進(jìn)行常規(guī)細(xì)胞學(xué)檢查.所有病例術(shù)后經(jīng)過(guò)平均為1年的隨訪. 研究結(jié)果表

3、明:CEA mRNA和CK-20 mRNA的陽(yáng)性率和值均與腫瘤的侵潤(rùn)度(T),分期以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān).在一個(gè)合理界定值上,CEA和cK-20檢測(cè)的敏感度與特異度均為100﹪和100﹪,而常規(guī)的細(xì)胞學(xué)檢查則為 33﹪和100﹪.CFA或CK20的水平異常與大腸癌手術(shù)后無(wú)瘤生存率密切相關(guān),通過(guò)實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法,測(cè)定腹腔沖洗液中CEA和CK20的值,顯示出高于常規(guī)細(xì)胞學(xué)檢查的特異性和敏感性,是檢測(cè)大腸癌腹腔微轉(zhuǎn)移的有效方法.為臨床治療大

4、腸癌分子水平的診斷、以及隨后的對(duì)于具有高危因素病人的輔助化療提供了一個(gè)新的策略. 實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)仍然是影響胃癌患者預(yù)后的重要因素,腫瘤細(xì)胞在腹腔、淋巴結(jié)、外周血及骨髓中的微轉(zhuǎn)移是腫瘤轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)的基礎(chǔ). 以CEA mRNA和CK-20mRNA為靶基因,實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR法檢測(cè)微轉(zhuǎn)移腫瘤細(xì)胞,是近年來(lái)該領(lǐng)域研究的焦點(diǎn).本文擬從方法學(xué)、檢測(cè)結(jié)果及臨床意義等方面對(duì)實(shí)時(shí)熒光定量RT-PeR檢測(cè)胃癌患者腹腔沖洗液游

5、離細(xì)胞CEA和CK-20基因的研究進(jìn)展加以綜述. 方法：對(duì)從1998-2006年3504例在浙江省腫瘤醫(yī)院接受治療人腸癌病例,以13年為一年份組別進(jìn)行同顧性分析,所有病例均經(jīng)過(guò)病歷確診. 結(jié)果：2004-2006年段與1998-2000年段比較,人腸癌收治率上升了98﹪,平均每年上升10.9﹪.70歲以上的高齡人腸癌病例發(fā)病上升明顯,2004-2006年占到同期病例14﹪:中何發(fā)病年齡為54.5歲:男女比例為:1.19: