大腸癌腹腔內(nèi)游離癌細(xì)胞的聯(lián)合檢測(cè)及NF-κB、MMPs表達(dá)在大腸癌腹腔微轉(zhuǎn)移中的意義.pdf

1、目的：本研究通過(guò)聯(lián)合檢測(cè)大腸癌患者腹腔游離癌細(xì)胞(Intraperitoneal free cancer cells，IFCCs)相關(guān)腫瘤標(biāo)志物的表達(dá)，探討大腸癌腹腔內(nèi)微轉(zhuǎn)移情況，為臨床上診斷大腸癌腹腔微轉(zhuǎn)移尋找敏感特異的方法，并分析大腸癌腹腔微轉(zhuǎn)移與臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系。進(jìn)一步探討核轉(zhuǎn)錄因子vd3(Nuclear Factor kappa B，NF-kB)、金屬基質(zhì)蛋白酶(Matrixmetalloproteinase，MMPs)的

2、表達(dá)在大腸癌腹腔微轉(zhuǎn)移中的作用及意義。 方法：選取河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院外二科2006年6-12月間手術(shù)治療的大腸癌(包括結(jié)腸癌與腹膜返折以上的直腸癌)患者80例，另選10例婦產(chǎn)科子宮肌瘤手術(shù)病例做對(duì)照組。取腹腔沖洗液，行常規(guī)腹腔沖洗液細(xì)胞學(xué)檢測(cè)(Peritoneallavage cyctology,PLC)和CEA、CK20的免疫細(xì)胞化學(xué)染色(Immunocytochemistry,ICC)，檢測(cè)腹腔沖洗液游離癌細(xì)胞情況。并采

3、用免疫組織化學(xué)方法(Immunohisto-chemicalteghuiques，IHC)檢測(cè)腫瘤原發(fā)灶組織的NF-kB、MMP-9、MMP-10、MMP-11的蛋白表達(dá)，分析這些蛋白表達(dá)與腹腔微轉(zhuǎn)移的關(guān)系。利用掃描電鏡(Scanning electronmicroscopy,SEM)與透射電鏡(Transmission electron micros-copN TEM)，觀察MMP-9表達(dá)陽(yáng)性且有腹腔微轉(zhuǎn)移的大腸癌組織細(xì)胞的連接特點(diǎn)。

4、 結(jié)果： 1、腹腔沖洗液細(xì)胞學(xué)檢測(cè)癌細(xì)胞陽(yáng)性率為8.7％(7/80)；CEA、CK20檢測(cè)的陽(yáng)性率分別為28％(23/80)和22％(18/80)，兩者與PLC比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)；CEA、CK20聯(lián)合檢測(cè)的陽(yáng)性率為35％(28/80)，與PLC比較亦有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)，明顯提高了檢出率。與CEA、CK20單獨(dú)檢測(cè)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，但聯(lián)合檢測(cè)可以降低漏檢率。 2、大腸癌腹腔微轉(zhuǎn)移率與患者性別

5、、年齡、侵及腸腔周徑大小以及有無(wú)肝轉(zhuǎn)移無(wú)關(guān)(P>0.05)。腫瘤侵及漿膜與未侵及漿膜患者的腹腔微轉(zhuǎn)移率分別為45.3％(24/53)和14.8％(4/27)，兩者比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者的腹腔微轉(zhuǎn)移率為51.2％(22/43)，無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組為16.2％(6/37)，兩者比較亦有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。低分化患者腹腔微轉(zhuǎn)移率為71.4％(5/7)，中分化為32.7％(18/55)，高分化為16.7％(3/18

6、)，兩兩比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。大體類型中隆起型患者腹腔微轉(zhuǎn)移率15.4％(4/26)，潰瘍型為35.6％(16/45)，浸潤(rùn)型為66.7％(6/9)，兩兩比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。 3、大腸癌組織中NF-kB蛋白表達(dá)總陽(yáng)性率為73.8％(59/80)。其中強(qiáng)陽(yáng)性率為40％，弱陽(yáng)性率為33.8％。NF-KB強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)患者中的腹腔轉(zhuǎn)移率為56.3％(18/32)，陰性表達(dá)與弱陽(yáng)性表達(dá)中腹腔微轉(zhuǎn)移率分別為19.0

7、％(4/21)、22.2％(6/27)。強(qiáng)陽(yáng)性組與后兩組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)，而后兩組之間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。 4、大腸癌組織中MMP-9蛋白表達(dá)陽(yáng)性率為82.5％(66/80)。其中強(qiáng)陽(yáng)性50％，弱陽(yáng)性32.5％。強(qiáng)陽(yáng)性組中的腹腔微轉(zhuǎn)移率為50.0％(20/40)，且占所有檢出的微轉(zhuǎn)移患者的71.4％ (20/28)。弱陽(yáng)性組與陰性組分別為30.0％、14.3％。強(qiáng)陽(yáng)性組與后兩組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(

8、P<0.05)，而后兩組之間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。 5、MMP-10、MMP-11在大腸癌組織中的表達(dá)率分別為35％(28/80)和42.5％(34/80)，兩者表達(dá)與大腸癌腹腔微轉(zhuǎn)移之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 6、大腸癌組織中NF-κB、MMP-9的強(qiáng)表達(dá)的患者腹腔微轉(zhuǎn)移率明顯升高。NF-κB、MMP-9進(jìn)行x<'2>線性趨勢(shì)分析，總變異X<'2>=21.407，P<0.05線性回歸分量X<'2>=16.940

9、，P<0.05偏離線性回歸分量無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。說(shuō)明NF-κB與MMP-9之間不僅存在相關(guān)關(guān)系且為線性關(guān)系。 7、掃描電鏡下，MMP-9表達(dá)陽(yáng)性的腹腔微轉(zhuǎn)移患者腫瘤組織中細(xì)胞成份多而細(xì)胞間質(zhì)成分少，組織結(jié)構(gòu)松散，可見(jiàn)到帶有偽足的腫瘤細(xì)胞；透射電鏡觀察，細(xì)胞間連接僅以簡(jiǎn)單連接、接觸連接為主，而缺乏連接最為牢固的橋粒連接。 結(jié)論： 1、聯(lián)合檢測(cè)CEA、CK20可以提高大腸癌腹腔微轉(zhuǎn)移的檢出率，是一種敏感特異的檢測(cè)方法。