免疫磁性微球技術(shù)在人血清白蛋白純化中的應(yīng)用.pdf

1、人血清白蛋白(HSA)是一種具有重要生理功能、在臨床醫(yī)學(xué)實踐中具有廣泛用途的醫(yī)用蛋白質(zhì)。臨床醫(yī)療中主要用于手術(shù)輸血和危重病人補(bǔ)液，治療燒傷休克、發(fā)燒、水腫、低蛋白血癥和紅細(xì)胞過多癥等，是臨床上一種重要藥物[1]. 本研究選用人血清白蛋白(HSA)為實驗對象，利用免疫磁性微球(IMMS)技術(shù)對其進(jìn)行分離純化研究。 首先制備了抗-HSA(Anti-HSA-IgG)血清，經(jīng)分級鹽析、DEAE-32cellulose和Sepha

2、dex-G25葡聚糖柱精制IgG抗體。 采用分散聚合法制備了粒徑為3.6-10μm的聚苯乙烯磁性微球，以其為載體考察抗體的致敏條件和免疫磁性分離條件。結(jié)果表明聚苯乙烯磁性微球經(jīng)EDC(碳化亞胺)活化后，BSA偶聯(lián)于聚苯乙烯磁性微球的偶聯(lián)量達(dá)到576±40.3μg/mg,通過分子量換算對兔抗人HSA抗體的偶聯(lián)量大約為1270μg/mg. 采用上述聚苯乙烯磁性對HSA進(jìn)行3次免疫磁性分離，以兔抗人血清白蛋白抗體(rabbit

3、anti-HSAantibodies)作為捕獲抗體，將酶聯(lián)羊抗人血清白蛋白抗體(goatanti-HSA-HPRantibodies)作為檢測抗體，建立起雙抗體夾心酶聯(lián)免疫法(SandwichELISA)，檢測未被偶聯(lián)HSA量，而計算出磁性免疫微球?qū)SA的回收率。其三次回收率分別為86.5±3.7％、69.0±0.6％和40.8±0.8％.SDS-PAGE凝膠電泳分析純度為95％。 本研究結(jié)果表明，免疫磁性微球技術(shù)可直接從人血