重組人血清白蛋白在巴斯德畢赤酵母中的表達.pdf

1、人血清白蛋白是一種在醫(yī)學上應用廣泛,需求量大的蛋白質藥物.而目前血漿提取生產的方式難以滿足市場的要求,用基因工程方法生產人血清白蛋白無疑具有巨大的商業(yè)價值.由于巴斯德畢赤酵母表達系統(tǒng)自身的許多優(yōu)點,使得其在表達外源蛋白中具有十分大的優(yōu)勢.該文的工作是用巴斯德畢赤酵母(Pichia Pastoris)構建并篩選分泌重組人血清白蛋白(rHSA)基因工程高產菌株,并對其發(fā)酵純化條件進行初步研究.經(jīng)過初步探索,rHSA的純化路線為:離心后上清液

2、經(jīng)60℃處理8h對蛋白酶滅活,冷至常溫時離心除去熱處理的變性蛋白;再經(jīng)透析袋脫鹽交換緩沖液,使得其條件為0.005mol/L,pH6.4的磷酸鈉緩沖液;再將其上平衡后的DEAE Sephrose FF陰離子交換柱;然后以0.010mol/L,pH8.0的磷酸鈉緩沖液加以0.10mol/L,0.20mol/LNaCl濃度進行梯度洗脫.該分離純化路線對工業(yè)化路線有一定的參考價值,也對P.Pastoris表達的其它蛋白的純化有一定的參考價值.