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文檔簡(jiǎn)介
1、人血清白蛋白是一種在醫(yī)學(xué)上應(yīng)用廣泛,需求量大的蛋白質(zhì)藥物.而目前血漿提取生產(chǎn)的方式難以滿足市場(chǎng)的要求,用基因工程方法生產(chǎn)人血清白蛋白無疑具有巨大的商業(yè)價(jià)值.由于巴斯德畢赤酵母表達(dá)系統(tǒng)自身的許多優(yōu)點(diǎn),使得其在表達(dá)外源蛋白中具有十分大的優(yōu)勢(shì).該文的工作是用巴斯德畢赤酵母(Pichia Pastoris)構(gòu)建并篩選分泌重組人血清白蛋白(rHSA)基因工程高產(chǎn)菌株,并對(duì)其發(fā)酵純化條件進(jìn)行初步研究.經(jīng)過初步探索,rHSA的純化路線為:離心后上清液
2、經(jīng)60℃處理8h對(duì)蛋白酶滅活,冷至常溫時(shí)離心除去熱處理的變性蛋白;再經(jīng)透析袋脫鹽交換緩沖液,使得其條件為0.005mol/L,pH6.4的磷酸鈉緩沖液;再將其上平衡后的DEAE Sephrose FF陰離子交換柱;然后以0.010mol/L,pH8.0的磷酸鈉緩沖液加以0.10mol/L,0.20mol/LNaCl濃度進(jìn)行梯度洗脫.該分離純化路線對(duì)工業(yè)化路線有一定的參考價(jià)值,也對(duì)P.Pastoris表達(dá)的其它蛋白的純化有一定的參考價(jià)值.
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