人血清白蛋白熒光探針的研發(fā)與生物學應用.pdf

1、人血清白蛋白是血漿中含量最豐富的蛋白質,約占到血漿中蛋白總量的50-60％。人血清白蛋白在維持人體健康中發(fā)揮著不可替代的重要作用。白蛋白由肝臟合成并快速釋放到血中,健康成人血中白蛋白的正常值范圍為35-55 g/L。但多種疾病都會導致血清白蛋白的水平下降。因此,人血中白蛋白的定量測定被廣泛用于臨床相關疾病的診斷。因此,準確評判血漿白蛋白濃度對于臨床應用意義重大。
　　目的:開發(fā)一種準確度高,檢測靈敏,受環(huán)境干擾小,生物兼容性好、操

2、作簡單、成本低的白蛋白熒光探針(E)-1-（2-二氰基甲烯基-3-氰基-5,5-二甲基呋喃)-2-（4-氨基苯基)-乙烯,簡稱ACDM,并對其進行生物學評價并應用于生物樣品的檢測。
　　方法:(1)對ACDM的化學及物理穩(wěn)定性（包括pH、有機溶劑、溫度及結合速度等)進行考證;(2) ACDM的蛋白選擇性及對內(nèi)源與外源性物質的抗干擾性測定;(3)通過已知藥物替代法和jobs plot方法對ACDM與白蛋白結合位點的預測,并運用分子對

3、接和分子動力學確定;(4)測定實際生物樣品:28例正常人血漿和HepG2細胞產(chǎn)白蛋白的定量,并通過BCG方法和蛋白組學方法進行對照確認。
　　結果:(1)最佳反應pH為8.0,有機溶劑DMSO用量為1％,ACDM終濃度為20μM,溫度保持室溫下操作,體系反應3s即可;(2) ACDM只對白蛋白產(chǎn)生熒光值響應,并且抗干擾性很穩(wěn)定;(3)確認ACDM在白蛋白上的結合位點為非藥物位點;(4)所測得血漿及細胞產(chǎn)白蛋白的含量與對照方法一致。