胰島細(xì)胞移植的相關(guān)研究.pdf

1、目的：研究器官聯(lián)合切取中的不同胰腺獲取方法是否對(duì)于胰島細(xì)胞的活性有影響。探討腦死亡自愿捐贈(zèng)器官的供者多器官聯(lián)合切取時(shí)用于人類胰島細(xì)胞移植的胰腺獲取方法中，采用高滲枸櫞酸鹽嘌呤溶液經(jīng)原位灌注后胰島細(xì)胞的活性和冷缺血時(shí)間的關(guān)系。研究人類胰島細(xì)胞移植中供受者的HLA配型和胰島細(xì)胞存活的關(guān)系。以豬的胰島移植探討胰島細(xì)胞移植后穿刺出血及肝內(nèi)感染的發(fā)生。 方法：采用高滲枸櫞酸鹽嘌呤溶液經(jīng)過供者腹主動(dòng)脈進(jìn)行原位灌注后，進(jìn)行肝臟、胰腺、腎臟聯(lián)合

2、切取及各器官的單獨(dú)切取，在相同的冷缺血時(shí)間內(nèi)，采用膠原酶P消化胰腺，分離并純化胰島細(xì)胞，進(jìn)行胰島細(xì)胞活性染色，然后對(duì)比不同的切取方法是否對(duì)于胰島細(xì)胞的活性率有影響。高滲枸櫞酸鹽嘌呤溶液1,500-2,000ml經(jīng)主動(dòng)脈原位灌注后，進(jìn)行腎-胰腺-十二腸-脾聯(lián)合切取，切取后分離腎與胰腺-十二腸-脾，采用膠原酶P消化胰腺，分離并純化胰島細(xì)胞，進(jìn)行胰島細(xì)胞活性染色。并將胰島細(xì)胞培養(yǎng)進(jìn)行胰島素釋放試驗(yàn)。將胰島細(xì)胞進(jìn)行固定，切片后進(jìn)行透射電鏡觀察胰

3、島細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)。將已知HLA配型的胰島細(xì)胞分別加入到HLA匹配組和錯(cuò)配組的血液當(dāng)中去，觀察混合培養(yǎng)1h后的血液當(dāng)中血小板、中性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞變化以及培養(yǎng)1h和24h后觀察活性胰島細(xì)胞的數(shù)量變化。采用高滲枸櫞酸鹽嘌呤溶液經(jīng)過豬的腹主動(dòng)脈進(jìn)行原位灌注后，進(jìn)行胰腺切取，采用膠原酶P消化胰腺，分離并純化胰島細(xì)胞，然后對(duì)豬胃左靜脈穿刺后進(jìn)行肝內(nèi)胰島細(xì)胞移植，對(duì)受者豬進(jìn)行飼養(yǎng)一周后，進(jìn)行肝臟的病理學(xué)檢查。 結(jié)果：肝臟、胰腺、腎臟

4、聯(lián)合切取及各器官的單獨(dú)切取順利，無(wú)污染，在冷缺血時(shí)間5h以內(nèi)胰島細(xì)胞活性率都在80％，經(jīng)原位灌注后各獲取方法之間對(duì)于胰島細(xì)胞活性無(wú)明影響。胰腺與腎臟經(jīng)高滲枸櫞酸鹽嘌呤溶液原位灌注滿意，胰島細(xì)胞的活性與冷缺血時(shí)間呈負(fù)相關(guān)，冷保存指數(shù)和胰島細(xì)胞活性呈正相關(guān)。胰島素釋放試驗(yàn)胰島細(xì)胞功能良好，電鏡觀察胰島細(xì)胞結(jié)構(gòu)良好。肝臟、胰腺、腎臟聯(lián)合切取及各器官的單獨(dú)切取順利，人類胰島暴露于未經(jīng)抗凝的人類血中，胰島將誘發(fā)一個(gè)迅速血細(xì)胞消耗。進(jìn)行血小板激、中

5、性粒細(xì)胞和單核細(xì)胞計(jì)數(shù)，HLA錯(cuò)配組(1.0±0.72×109/L，0.54±0.24×109/L，0.01±0.00×109/L)，HLA匹配組(6.0±0.27×109/L，0.63±0.19×109/L，0.03±0.01×109/L)，無(wú)論HLA錯(cuò)配還是匹配與對(duì)照組相比較血細(xì)胞都發(fā)生明顯的消耗；加入肝素后血細(xì)胞計(jì)數(shù)HLA錯(cuò)配組(57.2±21.10×109/L，1.74±0.87×109/L，0.75±0.24×109/L)，H

6、LA匹配組(67.9±19.0×109/L，3.42±0.61×109/L，0.47±0.08×109/L)與對(duì)照組比較P＜0.05，反應(yīng)明顯減輕；進(jìn)行胰島細(xì)胞體外培養(yǎng)24h活性胰島細(xì)胞數(shù)量分別為：匹配組(1.085±0.167×105/L)，錯(cuò)配組(0.697±0.193×105/L)。P＜0.05，具有顯著性差異，良好組織相容性有利于胰島細(xì)胞存活。豬的胰島細(xì)胞移植共進(jìn)行12例，穿刺部位出血占50％，肝感染占33.3％。 結(jié)論