T細(xì)胞疫苗誘導(dǎo)異種胰島移植免疫耐受的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、大量研究證實(shí)T細(xì)胞疫苗(T cell vaccination，TCV)可以抑制同種異體間移植免疫排斥反應(yīng)，延長移植物在受者體內(nèi)的存活時(shí)間，關(guān)于TCV在誘導(dǎo)異種胰島細(xì)胞移植免疫耐受方面的研究較少。通過移植異種胰島細(xì)胞治療Ⅰ型糖尿病(IDDM)雖然供源豐富，但是異種間排斥反應(yīng)強(qiáng)烈，如何誘導(dǎo)異種胰島細(xì)胞移植免疫耐受的問題亟待解決。TCV是一種潛在的誘導(dǎo)移植免疫耐受的方法，本研究在移植前用TCV免疫受者，移植異種胰島細(xì)胞后觀察受者血糖和體重的變

2、化。
　　 目的：探討特異性TCV誘導(dǎo)異種胰島細(xì)胞移植免疫耐受的作用。
　　 方法：通過腹腔注射鏈脲佐菌素(STZ)(160mg/kg)誘導(dǎo)建立Balb/c小鼠Ⅰ型糖尿病模型。取Wistar大鼠胰腺，用酶消化法和(Ficoll400)不連續(xù)密度梯度離心法分離純化Wistar大鼠胰島細(xì)胞，整個過程保持無菌操作。供體Wistar大鼠脾淋巴細(xì)胞(絲裂霉素處理)和受體Balb/c小鼠脾淋巴細(xì)胞按1∶1比例混合培養(yǎng)(細(xì)胞濃度為2×

3、105/ml)，加入刀豆蛋白A(ConA)誘導(dǎo)增殖48小時(shí)后收集細(xì)胞，調(diào)細(xì)胞濃度制成供者抗原特異性T細(xì)胞疫苗備用。實(shí)驗(yàn)隨機(jī)分為三組，A：糖尿病小鼠組；B：PBS對照組：糖尿病小鼠+胰島細(xì)胞移植+PBS平衡鹽溶液(對照組)；C：T細(xì)胞疫苗免疫組：糖尿病小鼠+胰島細(xì)胞+T細(xì)胞疫苗(實(shí)驗(yàn)組)。于胰島細(xì)胞移植d-14，d-7，d-1，經(jīng)腹腔注射疫苗細(xì)胞(1×107/ml、0.2ml，i.p)于實(shí)驗(yàn)組Balb/c小鼠，對照組用PBS替代。d0將W

4、istar大鼠的胰島細(xì)胞按1500IEQ/只經(jīng)肝門靜脈導(dǎo)入Balb/c小鼠體內(nèi)，移植后觀測小鼠血糖和體重的變化。Balb/c小鼠的脾細(xì)胞作為反應(yīng)細(xì)胞，絲裂霉素處理的Wistar大鼠脾細(xì)胞作為刺激細(xì)胞，按1∶1的比例(細(xì)胞濃度為1×106/m1)混合培養(yǎng)，疫苗接種前和每次接種后第五天分別進(jìn)行單向混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)(MLR)。
　　 結(jié)果：模型Balb/c小鼠隨機(jī)血糖值連續(xù)2次＞16.7mmol/l，并穩(wěn)定五日視為造模成功。DTZ染色

5、胰島細(xì)胞，產(chǎn)量為(3570±356)IEQ/胰腺，純度達(dá)到70％-80％，AO-PI熒光染色胰島細(xì)胞，活率達(dá)到80-90％。在觀察期間，移植胰島細(xì)胞前小鼠血糖值：糖尿病小鼠組(21.5±1.46)mmol/1，PBS組(20.6±1.57)mmol/l，TCV組(22.3±1.37)mmol/l。胰島細(xì)胞移植后：未移植組小鼠呈持續(xù)高血糖狀態(tài)，移植組小鼠血糖值24h后開始下降，移植d3時(shí)PBS組血糖值(11.2±0.86)mmol/l，移

6、植d4達(dá)到最低值(9.2±1.36)mmol/l，2天平臺期后開始升高，移植d8血糖值(19.4±1.53)mmol/l；移植d3時(shí)TCV疫苗組血糖值(11.8±1.84)mmol/l，移植d6達(dá)到最低值(6.4±1.67)mmol/l，14天平臺期后開始升高，移植d24血糖值(19.5±1.22)mmol/l。胰島細(xì)胞移植前：三組體重變化相似。胰島細(xì)胞移植后：糖尿病組小鼠體重持續(xù)下降，TCV組和PBS組小鼠體重在血糖值正常后逐漸升高，

7、PBS組在移植d10開始下降，TCV組體重持續(xù)增加至移植d26。MLR結(jié)果顯示：免疫前TCV組同PBS組平均OD值比較(P＞0.05)無明顯差異，免疫后相同時(shí)間點(diǎn)TCV組平均OD值明顯低于PBS組(P＜0.01)，TCV組免疫后平均OD值顯著低于免疫前(P＜0.01)，PBS組免疫前后平均OD值無明顯變化(P＞0.05)，無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)論：供體特異性T細(xì)胞疫苗免疫受體可以顯著延長異種胰島移植物的存活時(shí)間，是一種潛在誘導(dǎo)