骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞與胰島共移植對(duì)胰島移植物β細(xì)胞早期凋亡的保護(hù)作用及機(jī)理研究.pdf

1、目的:
　　減少胰島移植物β細(xì)胞早期凋亡是同種系胰島移植成功的關(guān)鍵因素之一。本研究旨在觀察骨髓來(lái)源的間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)與胰島共移植對(duì)胰島移植物β細(xì)胞早期凋亡的影響，并初步探討其可能機(jī)理。
　　方法:
　　全骨髓貼壁法分離培養(yǎng)BALB/c乳鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)并鑒定。膠原酶消化法獲取供體胰島并計(jì)數(shù)。腹腔注射STZ(140mg/kg)建立糖尿病BALB/c小鼠模型。造模成功后，將小鼠隨機(jī)分配到4個(gè)實(shí)驗(yàn)組

2、:①胰島單獨(dú)移植組:腎包膜下注射胰島350個(gè)(n=19)，②BMSCs與胰島共移植組:腎包膜下注射350個(gè)胰島及7×105BMSCs(n=19)，③BMSCs單獨(dú)移植組:腎包膜下注射7×105BMSCs(n=6)，④假手術(shù)組:腎包膜下注射等量RMPI1640液(n=6)。觀察術(shù)后血糖變化。術(shù)后第7天、14天、28天行糖耐量試驗(yàn)(IPGTT)檢測(cè)胰島功能。TUNEL法檢測(cè)術(shù)后1、3、7、28天胰島移植物β細(xì)胞凋亡狀況;透視電鏡觀察胰島移植

3、物β細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)結(jié)構(gòu)改變;免疫熒光法觀察胰島移植物β細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)指標(biāo)免疫球蛋白重鏈結(jié)合蛋白(binding immunoglobulin heavy chain protein，BIP)和CCAAT/增強(qiáng)子結(jié)合蛋白(CCAAT/enhancer-binding protein homologousprotein，CHOP)的表達(dá)。
　　結(jié)果:
　　1.BMSCs與胰島共移植組血糖生存曲線顯著優(yōu)于胰島單獨(dú)移植組、BMSCs

4、單獨(dú)移植組和假手術(shù)組。(P＜0.01)
　　2.BMSCs與胰島共移植組術(shù)后第14和28天IPGTT血糖曲線顯著優(yōu)于胰島單獨(dú)移植組、BMSCs單獨(dú)移植組和假手術(shù)組(AUC:P＜0.05)。術(shù)后第7，14，28天，BMSCs與胰島共移植組血漿胰島素水平均顯著高于胰島單獨(dú)移植組、BMSCs單獨(dú)移植組和假手術(shù)組。(P＜0.05)
　　3.術(shù)后第1、3，7天，BMSCs與胰島共移植組其胰島移植物β細(xì)胞凋亡率顯著低于胰島單獨(dú)移植組（d

5、ay1:7.06±3.10％ vs.15.18±6.23％,p＜0.05; day3:5.50±2.70％vs.12.40±4.24％, p＜0.05;day7:4.11±1.96 vs.8.63±1.88，p＜0.05）。術(shù)后第28天兩組無(wú)顯著差異（2.38±0.47 vs.2.39±1.63 p＞0.05）。
　　4.透視電鏡觀察到，胰島單獨(dú)移植組其移植物胰島移植物β細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)明顯腫脹變形;而B(niǎo)MSCs與胰島共移植組其內(nèi)質(zhì)網(wǎng)腫

6、脹、變形程度減輕。
　　5.免疫熒光染色提示:術(shù)后1，3，7天BMSCs與胰島共移植組其胰島移植物β細(xì)胞的BIP，CHOP熒光強(qiáng)度顯著組低于單獨(dú)移植組。（BIP:第1天0.052±0.024 vs.0.086±0.036，p＜0.05;第3天0.039±0.011 vs.0.094±0.026,P＜0.05;第7天0.023±0.008 vs.0.043±0.013,p＜0.05。 CHOP: day10.042±0.012 vs

7、.0.099±0.025p＜0.05;day30.044±0.014vs.0.110±0.020, p＜0.05; day70.022±0.008 vs.0.055±0.008,p＜0.05)。第28天兩組胰島移植物β細(xì)胞BIP熒光強(qiáng)度無(wú)顯著差異(BIP: day280.050±0.017vs.0.049±0.003, p＞0.05。 CHOP: day280.021±0.006 vs.0.031±0.013, p＞0.05)。