間充質(zhì)干細(xì)胞誘導(dǎo)異種胰島細(xì)胞移植免疫耐受的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、間充質(zhì)干細(xì)胞(Marrow mesenchymAlstem cells,MSC)是存在于成體組織中的多能干細(xì)胞,除了組織修復(fù)和再生功能外,還發(fā)現(xiàn)MSC還具有免疫抑制特性。目前，移植胰島治療1型糖尿病（IDDM）已初見療效，但是免疫排異反應(yīng)強(qiáng)烈，免疫抑制劑的長期應(yīng)用,會(huì)給患者帶來副作用和潛在的危險(xiǎn)，如何誘導(dǎo)胰島細(xì)胞移植免疫耐受的問題亟待解決。大量研究證實(shí)MSC可以抑制同種異體間移植免疫排斥反應(yīng)，延長移植物在受者體內(nèi)的存活時(shí)間，關(guān)于MSC在

2、誘導(dǎo)異種胰島細(xì)胞移植免疫耐受方面的研究較少。MSC是一種潛在的誘導(dǎo)移植免疫耐受的方法，本研究用MSC誘導(dǎo)異種胰島細(xì)胞的移植，觀察受者血糖和體重的變化，為解決細(xì)胞來源和免疫排異問題提供一定的依據(jù)。
　　 目的：探討MSC對異種胰島細(xì)胞移植免疫耐受的調(diào)節(jié)作用。
　　 方法：通過腹腔注射鏈脲佐菌素（STZ）（160mg/kg）誘導(dǎo)建立Balb/c小鼠Ⅰ型糖尿病模型。取Wistar大鼠胰腺，用酶消化法和不連續(xù)密度梯度離心法分離純

3、化Wistar大鼠胰島細(xì)胞，整個(gè)過程保持無菌操作。用密度梯度離心法結(jié)合貼壁培養(yǎng)出MSC細(xì)胞，并進(jìn)行原代培養(yǎng)，取第三代做移植供源，并調(diào)整細(xì)胞數(shù)至2×106/ML。將接受胰島移植的Balb/c受體鼠30只隨機(jī)分為：A 糖尿病小鼠組；B 實(shí)驗(yàn)組（糖尿病小鼠+胰島細(xì)胞+MSC 聯(lián)合移植組）；C對照組（糖尿病小鼠+胰島細(xì)胞移植組）。于胰島細(xì)胞移植d-14，d-7，d-1，胰島細(xì)胞和MSCs 各0.5ML 聯(lián)合移植入受體BALB/C 糖尿病小鼠的腎

4、包膜下；對照組,單純胰島細(xì)胞懸液0.5ML 移植入受體小鼠腎包膜下。移植后觀測小鼠血糖和體重的變化。
　　 結(jié)果：模型Balb/c小鼠隨機(jī)血糖值連續(xù)2次＞16.7mmol/l，并穩(wěn)定五日視為造模成功。
　　DTZ 染色胰島細(xì)胞，產(chǎn)量為（3658±375）IEQ/胰腺，純度達(dá)到70％-80％，AO-PI 熒光染色胰島細(xì)胞，活率達(dá)到80-90％。在觀察期間，移植胰島細(xì)胞前小鼠血糖值：糖尿病小鼠組（22.3±1.66）mmol

5、/l，對照組（21.6±1.73）mmol/l，實(shí)驗(yàn)組（23.3±1.29）mmol/l。胰島細(xì)胞移植后：未移植組小鼠呈持續(xù)高血糖狀態(tài)，移植組小鼠血糖值24h后開始下降，移植d3時(shí)對照組血糖值（11.3±0.91）mmol/l，移植d4 達(dá)到最低值（9.6±1.47）mmol/l，2天平臺期后開始升高，移植d8 血糖值（18.9±1.62）mmol/l；移植d3時(shí)實(shí)驗(yàn)組血糖值（11.6±1.77）mmol/l，移植d6 達(dá)到最低值（6.