生長(zhǎng)抑素減輕小鼠胰島移植過程中胰腺外分泌細(xì)胞對(duì)移植胰島損傷的研究.pdf

1、本文主要從以下幾部分進(jìn)行闡述：
　　第一部分 小鼠胰島分離、純化及功能檢測(cè)
　　目的:分離純化小鼠胰島。
　　方法:采用膽總管逆行灌注膠原酶的方法來分離純化小鼠胰島，同時(shí)使用雙硫腙、臺(tái)盼藍(lán)以及葡萄糖刺激實(shí)驗(yàn)來檢驗(yàn)胰島的功能。
　　結(jié)果:每只小鼠可獲150左右個(gè)胰島，活性及純度都大于90％。葡萄糖刺激實(shí)驗(yàn)表明胰島功能正常。
　　結(jié)論:采用課題組已經(jīng)成熟的實(shí)驗(yàn)方法，可以獲得高純度、功能良好的胰島。
　　第

2、二部分 糖尿病小鼠左腎被膜下胰島細(xì)胞與胰腺外分泌細(xì)胞共同移植動(dòng)物模型的建立
　　目的:建立糖尿病小鼠左腎被膜下同種異體胰島細(xì)胞與胰腺外分泌細(xì)胞共同移植動(dòng)物模型及探討胰腺外分泌細(xì)胞對(duì)胰島移植物的損傷作用。
　　方法:鏈脲佐菌素腹腔注射誘導(dǎo)BALB/C小鼠成為糖尿病小鼠。單純移植組(n=10)每只小鼠于左腎被膜上極移植胰島細(xì)胞250個(gè)，共同移植組(n=10)每只小鼠于左腎被膜上下極同時(shí)移植胰島細(xì)胞250個(gè)和等體積的胰腺外分泌細(xì)胞

3、，持續(xù)觀測(cè)血糖及生命體征變化，1個(gè)月后切除左腎并繼續(xù)檢測(cè)血糖。
　　結(jié)果:(1)胰島移植后，單純移植組及共同移植組血糖均逐步降至正常，共同移植組較單純移植組血糖恢復(fù)正常時(shí)間延遲，移植術(shù)后第2、3、4、5d，單純移植組受鼠血糖低于共同移植組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。切除兩組受鼠左腎3d后，兩組受鼠血糖均＞21mmol/L。
　　結(jié)論:(1)成功建立糖尿病小鼠左腎被膜下同種異體胰島細(xì)胞與胰腺外分泌細(xì)胞共同移植動(dòng)物模型。

4、(2)胰腺外分泌細(xì)胞與胰島細(xì)胞同時(shí)移植會(huì)延遲植入胰島功能恢復(fù)正常的時(shí)間。
　　第三部分 生長(zhǎng)抑素減輕小鼠胰島移植過程中胰腺外分泌細(xì)胞對(duì)移植胰島損傷的研究
　　目的:探討生長(zhǎng)抑素如何減輕胰腺外分泌細(xì)胞對(duì)移植胰島的損傷及其機(jī)制。
　　方法:(1)體外實(shí)驗(yàn):選取20只雄性BALB/C小鼠，隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組(n=10)和對(duì)照組(n=10)，麻醉前30分鐘實(shí)驗(yàn)組按10ug/g腹腔注射生長(zhǎng)抑素，對(duì)照組注射等量的生理鹽水，然后分別收集

5、兩組小鼠的胰腺外分泌細(xì)胞及胰島細(xì)胞，流式細(xì)胞儀檢測(cè)兩種細(xì)胞凋亡情況。(2)體內(nèi)實(shí)驗(yàn):鏈脲佐菌素腹腔注射誘導(dǎo)BALB/C小鼠成為糖尿病小鼠。實(shí)驗(yàn)組(n=20)和對(duì)照組(n=20)分別于小鼠左腎被膜上下級(jí)同時(shí)移植250個(gè)胰島和等體積的胰腺外分泌細(xì)胞，術(shù)后實(shí)驗(yàn)組按10ug/g，tid，腹腔注射生長(zhǎng)抑素28天，對(duì)照組注射等量生理鹽水28天，同時(shí)兩組小鼠分別按5ug/g，qd，腹腔注射EDU28天，移植術(shù)后8天實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組小鼠分別進(jìn)行IPGTT

6、實(shí)驗(yàn)，移植術(shù)后10天及28天兩組各隨機(jī)選取10只小鼠分別切除左腎，免疫組織化學(xué)法檢測(cè)左腎包膜下抗淀粉酶抗體的表達(dá)，免疫熒光染色法檢測(cè)移植胰島β細(xì)胞增殖情況，并繼續(xù)檢測(cè)血糖。
　　結(jié)果:(1)流式檢測(cè)結(jié)果顯示實(shí)驗(yàn)組小鼠胰腺外分泌細(xì)胞凋亡率明顯高于對(duì)照組(P＜0.05)，胰島細(xì)胞凋亡率較對(duì)照組沒有明顯差別(P＞0.05)，(2)胰島移植后，兩組小鼠血糖均降至正常，對(duì)照組較實(shí)驗(yàn)組血糖恢復(fù)正常時(shí)間延遲(P＜0.05)，對(duì)照組的血糖平均水平

7、明顯高于實(shí)驗(yàn)組;IPGTT實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示移植物血糖調(diào)節(jié)功能正常;術(shù)后10天實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組移植物周圍均可見抗淀粉酶抗體陽(yáng)性顆粒，但實(shí)驗(yàn)組陽(yáng)性顆粒數(shù)較對(duì)照組減少(P＜0.05)，免疫熒光檢測(cè)顯示實(shí)驗(yàn)組移植胰島Insulin+/EDU+β細(xì)胞數(shù)較對(duì)照組明顯增多(P＜0.05)。術(shù)后28天，實(shí)驗(yàn)組抗淀粉酶抗體陽(yáng)性顆粒數(shù)較對(duì)照組明顯減少(P＜0.05)，但各組數(shù)量與移植術(shù)后10天相比均無明顯差別(P＞0.05)，實(shí)驗(yàn)組增值的β細(xì)胞數(shù)仍明顯高于對(duì)照組

8、(P＜0.05)，但與移植術(shù)后10天相比，各組增殖率均降低(P＜0.05)。
　　結(jié)論:(1)生長(zhǎng)抑素可以誘導(dǎo)小鼠胰島移植過程中損傷的胰腺外分泌細(xì)胞凋亡，而對(duì)胰島細(xì)胞凋亡沒有影響。(2)移植術(shù)后早期（10天之內(nèi)），生長(zhǎng)抑素可以明顯抑制胰腺外分泌細(xì)胞胰淀粉酶的分泌，促進(jìn)胰島β細(xì)胞增殖，10天至28天，生長(zhǎng)抑素仍可抑制胰腺外分泌細(xì)胞胰淀粉酶的分泌，但對(duì)胰島β細(xì)胞增殖沒有影響，(3)在胰島移植過程中使用生長(zhǎng)抑素可以減輕小鼠胰腺外分泌細(xì)胞