四種類型化學(xué)致敏物對細胞因子表達的影響.pdf

1、目的：探討不同類型化學(xué)致敏物作用于 THP-1源性巨噬細胞后產(chǎn)生的多種細胞因子，從而建立致敏反應(yīng)的細胞因子譜；以特異性細胞因子表達改變?yōu)闄z測指標(biāo)，進行動物實驗的研究驗證，尋找最靈敏的標(biāo)記物來檢測化學(xué)物對皮膚的潛在致敏性，為皮膚致敏體外方法的建立及其科學(xué)性和有效性驗證提供實驗數(shù)據(jù)和參考依據(jù)。
　　方法：1、將人單核細胞株THP-1細胞用佛波酯（PMA，0.1μg/ml）誘導(dǎo)72小時，使之轉(zhuǎn)化為具有貼壁能力的THP-1巨噬細胞。選擇4

2、種不同類型的化學(xué)致敏物硫酸鎳（NiSO4）、重鉻酸鉀（K2Cr2O7）、2,4-二硝基氯代苯（DNCB）、苯二胺（PPDA）、異氰酸酯（TDI）和2種非化學(xué)致敏物十二烷基磺酸鈉（SDS）、異丙醇（IPA）作用轉(zhuǎn)化的THP-1不同時間后，應(yīng)用 ELISA法檢測細胞培養(yǎng)上清中IL-6、TNF-α的表達水平，流式液相多重蛋白定量技術(shù)（CBA）檢測細胞培養(yǎng)上清中細胞因子 IL-1β、IL-8、IL-4、IL-10、INF-γ的表達水平。2、BA

3、LB/C小鼠30只，隨機分為3組，即對照組、0.5％NiSO4和2%NiSO4組。其中NiSO4組的小鼠應(yīng)用閉塞補丁的染毒方式染毒3天，而對照組小鼠染毒相同劑量的DMSO。流式液相多重蛋白定量技術(shù)（CBA）分別檢測血清和脾細胞培養(yǎng)上清中IL-1β、IL-6、TNF-α的表達水平，用EDU方法檢測T細胞增殖情況。
　　結(jié)果：1、NiSO4、DNCB、K2Cr2O7作用THP-1細胞6h，PPDA和TDI作12h時，細胞上清中 IL-

4、6、TNF-α、IL-1β、IL-8的表達量最高。2、化學(xué)致敏物 NiSO4、DNCB、K2Cr2O7、PPDA、TDI在最適時間點最適濃度刺激細胞分泌IL-6的水平分別為對照組的40、25、20、50、50倍，TNF-α水平為對照組的20、12、20、8、5倍，IL-1β水平為對照組的30、60、25、30、45倍，IL-8水平為對照組的15、12、15、12、7倍。3、非致敏物SDS與IPA處理組IL-6水平均有升高，其中SDS組升

5、高最明顯，約為空白對照組的20倍，TNF-α、IL-1β、IL-8表達水平無明顯變化。4、IL-4、IL-10、INF-γ等3種細胞因子未檢測出變化。5、小鼠染毒NiSO43天后，結(jié)果顯示：0.5%NiSO4染毒組和2%NiSO4染毒組小鼠血清中 TNF-α水平分別為7.88pg/ml，18.66pg/ml，高于對照組的2.98pg/ml，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；同時0.5%NiSO4染毒組和2%NiSO4染毒組小鼠血清中IL

6、-6水平分別為10.94pg/ml，22.55pg/ml，高于對照組的4.79pg/ml，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；而染毒組與對照組小鼠血清中 IL-1β水平無顯著差異。NiSO4染毒組脾細胞培養(yǎng)上清中 IL-6、TNF-α、IL-1β水平均顯著高于未染毒組（P<0.05），且隨著染毒劑量的升高，細胞上清中IL-6和TNF-α、IL-1β表達量也逐漸增加。6小鼠連續(xù)體內(nèi)染毒3天后，體內(nèi)EDU檢測結(jié)果發(fā)現(xiàn)：2%NiSO4染毒組T細