IL-22對HUVECs細(xì)胞因子表達(dá)、增殖功能及屏障功能的影響.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的:
  通過檢測IL-22(白細(xì)胞介素22)在細(xì)胞因子表達(dá)、細(xì)胞增殖功能以及屏障功能方面對HUVECs(人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞)的影響,來探討IL-22對血管炎發(fā)生發(fā)展的影響。
  方法:
  1.用半定量RT-PCR技術(shù)檢測IL-22R1在HUVECs中的表達(dá)情況。
  2.實時定量PCR技術(shù)以及Western blot技術(shù)分別用于檢測IL-22作用前后IL-6, IL-8, CCL2, ICAM1, VCAM1

2、, CXCR4及 CCL20等細(xì)胞因子在HUVECs中mRNA水平以及蛋白質(zhì)水平的表達(dá)變化情況。
  3.通過CCK8實驗檢測不同濃度的IL-22作用前后HUVECs的增殖能力變化情況與不同濃度的LPS對HUVECs的增殖抑制情況。另外將不同濃度的IL-22作用于HUVECs預(yù)處理24h后,再將等濃度的LPS作用于細(xì)胞24h,最后用CCK8實驗來檢測IL-22對LPS的增殖抑制是否有對抗作用。
  4.用FITC標(biāo)記的右旋糖

3、酐通過HUVE單層細(xì)胞的滲透率來檢測不同濃度的IL-22作用前后HUVECs的屏障功能變化情況以及不同濃度的LPS對HUVECs屏障功能的影響。另外將不同濃度的IL-22作用于HUVECs預(yù)處理24h后,再將等濃度的LPS作用于細(xì)胞24h,最后用FITC標(biāo)記的右旋糖酐通過HUVE單層細(xì)胞的滲透率來檢測IL-22對LPS的屏障破壞是否有對抗作用。
  結(jié)果:
  1.IL-22R1 mRNA在HUVECs中持續(xù)表達(dá)。
 

4、 2.IL-22作用于HUVECs后,趨化因子CCL2和 CCL20的表達(dá)在mRNA水平及蛋白質(zhì)水平均可見明顯增加,而炎癥因子IL-6及IL-8的表達(dá)則未見明顯變化。
  3.IL-22作用于HUVECs后,HUVECs的增殖率得到顯著提高。LPS可以顯著抑制HUVECs的增殖率。被IL-22預(yù)處理過的HUVECs其增殖率不受LPS的抑制。
  4.IL-22作用于HUVECs后,HUVECs的滲透率下降,occludin的

5、表達(dá)增強。LPS可以提高HUVECs的滲透率并降低occludin的表達(dá)。被IL-22預(yù)處理過的HUVECs其滲透率受LPS的影響減少,occludin的表達(dá)情況同單獨用IL-22作用后相似。
  結(jié)論:
  1.IL-22的受體IL-22R1在HUVECS中廣泛表達(dá),表明HUVECs是IL-22作用的靶細(xì)胞之一。
  2.IL-22還可以提高趨化因子CCL2與CCL20的表達(dá),卻對炎癥因子IL-6及IL-8的表達(dá)無明

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