Stats激活對(duì)缺血-再灌注誘導(dǎo)近曲腎小管上皮細(xì)胞凋亡的影響及其細(xì)胞內(nèi)機(jī)制.pdf

1、背景及目的：急性腎衰竭(Acute rena1 failure，ARF)是常見的臨床綜合癥。近半個(gè)世紀(jì)以來(lái)，在住院病人、尤其是重癥監(jiān)護(hù)病人中，ARF病死率一直居高不下。ARF最主要的形式是急性腎小管壞死(acute tubular necrosis，ATN)，而凋亡是ATN時(shí)腎小管上皮細(xì)胞死亡的主要方式，是ATN治療的重要靶點(diǎn)。但目前對(duì)引起腎小管上皮細(xì)胞凋亡的分子機(jī)制尚不清楚。深入了解KIN時(shí)凋亡的細(xì)胞內(nèi)機(jī)制非常重要。Janus激酶一信

2、號(hào)傳導(dǎo)與轉(zhuǎn)錄活化因子(Januskinase—signal transducers and activators of transcription，Jak-Stat)信號(hào)途徑可介導(dǎo)炎癥、增殖、凋亡、發(fā)育、腫瘤等過(guò)程，并受細(xì)胞因子信號(hào)傳導(dǎo)抑制因子(suppressors of cytokinesignaling，SOCS)負(fù)反饋調(diào)控。目前尚不清楚Jak-Stat-SOCS通路在ATN病理生理過(guò)程中的作用。本研究旨在探討Jak-Stat-

3、SOCS信號(hào)途徑是否參與缺血再灌注誘導(dǎo)ATN中的發(fā)病機(jī)制，試圖明確該途徑對(duì)缺血再灌注誘導(dǎo)的近曲腎小管上皮細(xì)胞凋亡的調(diào)控作用，以期尋找阻斷上皮細(xì)胞凋亡、改善ARF臨床預(yù)后的有效方法。 方法：制作缺血再灌注腎損傷的細(xì)胞模型，誘導(dǎo)體外培養(yǎng)的近曲腎小管上皮細(xì)胞凋亡。Western印跡、細(xì)胞免疫熒光染色檢測(cè)Statl,Stat3激活。使用特異性阻斷劑AG 490抑制酪氨酸激酶Jak2，或利用RNA干涉(RNA interference，R

4、NAi)技術(shù)分別基因敲低Statl和Stat3，通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)其對(duì)缺血再灌注誘導(dǎo)近曲腎小管上皮細(xì)胞凋亡的影響，判定Stat 1和Stat3激活在缺血再灌注誘導(dǎo)腎小管上皮細(xì)胞凋亡中的作用。應(yīng)用反轉(zhuǎn)錄一多聚酶鏈反應(yīng)(reversetranscription-p01ymerase chain reaction， RT-PCR)，Western印跡檢測(cè)Stats負(fù)反饋因子SOCS3是否被誘導(dǎo)表達(dá)，并利用RNAi技術(shù)基因敲低SOCS3，通過(guò)

5、Western印跡和流式細(xì)胞術(shù)觀察SOCS3敲低后對(duì)缺血再灌注誘導(dǎo)Statl，Stat3激活和上皮細(xì)胞凋亡的影響，探討Jak2-Stat 1／Sta3-SOCS3途徑激活在缺血再灌注誘導(dǎo)腎小管上皮細(xì)胞凋亡中的作用。最后穩(wěn)定轉(zhuǎn)染Stat3組成性激活質(zhì)粒，通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)Stat3組成性激活質(zhì)粒過(guò)表達(dá)對(duì)缺血再灌注誘導(dǎo)小管上皮細(xì)胞凋亡和線粒體膜電位的影響，以進(jìn)一步明確Stat3激活的保護(hù)作用及機(jī)制。 結(jié)果：在體外成功模擬缺血再灌注誘

6、導(dǎo)腎小管上皮細(xì)胞凋亡模型，發(fā)現(xiàn)Statl，Stat3在小管上皮細(xì)胞凋亡過(guò)程中存在一過(guò)性激活。Jak2特異性抑制劑AG490預(yù)處理可阻斷Statl，Stat3激活并加重細(xì)胞凋亡。Statl基因敲低可明顯抑制缺血再灌注誘導(dǎo)的Statl激活和腎小管上皮細(xì)胞凋亡，對(duì)Stat3激活無(wú)影響；Stat3基因敲低可明顯抑制缺血再灌注誘導(dǎo)Stat3激活，加重腎小管上皮細(xì)胞凋亡，對(duì)Statl激活無(wú)影響。缺血再灌注可誘導(dǎo)腎小管上皮細(xì)胞SOCS3 mRNA和蛋

7、白表達(dá)增多。SOCS3基因敲低可使缺血再灌注誘導(dǎo)的腎小管上皮細(xì)胞Stat3激活增強(qiáng)，凋亡減少。Stat3C過(guò)表達(dá)可抑制缺血再灌注誘導(dǎo)的腎小管上皮細(xì)胞線粒體膜電位下降和細(xì)胞凋亡，并上調(diào)抗凋亡蛋白Bc1-2表達(dá)。 結(jié)論：缺血再灌注可誘導(dǎo)近曲腎小管上皮細(xì)胞Jak2介導(dǎo)的Statl和Stat3激活，Statl和Stat3激活在缺血再灌注誘導(dǎo)的腎小管上皮細(xì)胞凋亡中作用相反，Statl激活可促進(jìn)凋亡，而Stat3激活可抑制細(xì)胞凋亡。缺血再灌